大肠杆菌表达重组人IL - 8 分离纯化工艺的建立

摘要　目的　建立重组人IL - 8 ( rhIL - 8) 大肠杆菌表达后的高效分离纯化工艺,以便获得高纯度的重组蛋白。方法　将已构建好的表达载体转化大肠杆菌HB101 ,经IPTG诱导进行高效表达。将离心收集到的菌体用超声破壁分离,收集包涵体和胞浆,其中包涵体部分经变性和复性处理后,与胞浆部分合并,进行肝素亲和层析柱分离,再经离子交换柱和凝胶层析柱过滤,得到最终纯品。蛋白纯度用SDS - PAGE 鉴定,EL ISA 法检测重组IL - 8含量。检测纯化后重组蛋白的生物学活性和热源质。结果　用大肠杆菌HB101 表达重组人IL - 8 ,具有较高的表达量(25mg/ ml) ,其分泌的重组蛋白以包涵体和胞浆的形式存在。经多步柱层析纯化后,可获得高纯度的重组IL- 8 蛋白(纯度> 95 %) 。该蛋白在体外具有趋化中性粒细胞游走的作用,兔温法检测热源质含量符合要求。结论大肠杆菌可高效表达rhIL - 8 ,该工艺流程可从大肠杆菌载体中获得具有生物学活性的高纯度rhIL - 8。