手动玻璃匀浆器
2019.3.28
为了纯化细胞蛋白质，采用有效的方法进行细胞破碎和固液分离是必要的。它是全过程的第一步，通常是将处于细胞不同位置的待纯化蛋白释放出来，溶入已知成分的溶液内。该步骤是目的蛋白初级分离纯化阶段的重要环节，它直接影响产物的回收率，也可能影响产物的纯度。
实验方法原理
通过固体剪切力破碎组织和细胞，释放蛋白进入溶液。市售的匀浆器主要有四类，刀片式组织破碎匀浆器、内切式组织匀浆器、玻璃匀浆器和用于规模生产的髙压匀浆器。玻璃匀浆器的匀浆头（杵）有玻璃制的，也有特夫隆制的，既可以手动也可以电动。由于匀浆过程中蛋白质被蛋白酶降解的可能性较小，所以匀浆是简便、迅速和风险小的组织破碎方法，是实验室首先考虑的方法之一。
实验材料
试剂、试剂盒
仪器、耗材
实验步骤
1. 用组织剪或芋术刀迅速将清洗的组织分离成适宜的小块，如 1 cm
2. 每体积湿重组织通常加 3～5 倍体积预冷的匀浆缓冲液至匀浆容器内；\......
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细胞破碎和蛋白质溶解实验
实验方法原理 通过固体剪切力破碎组织和细胞，释放蛋白进入溶液。市售的匀浆器主要有四类，刀片式组织破碎匀浆器、内切式组织匀浆器、玻璃匀浆器和用于规模生产的髙压匀浆器。玻璃匀浆器的匀浆头（杵）有玻璃制的，也有特夫隆制的，既可以手动也可以电动
细胞破碎和蛋白质溶解实验
的匀浆缓冲液至匀浆容器内；3. 制备匀浆 ：3.1 电力驱动的玻璃匀浆器以 500～1500 r／min 的速度，匀浆 3～6 次，每次 5～10 s 。3.2 手动玻璃匀浆器匀浆 10 ～20 次。3.3 刀片式组织破碎匀浆器和内切式组织
哺乳动物组织的匀浆实验
，匀浆组织数次，每次5〜10s。Dounce手动匀浆器：匀浆组织10〜20次。韦林搅切器：匀浆组织3〜4次，每次20〜30s，间隔10〜15%⑤把匀浆液倒入玻璃烧杯，把烧杯放在冰上，在4℃条件下温和搅动匀浆液30〜60min，以便充分提取蛋白
抗微管药物实验
1-2次。（3）以每克脑组织0.5~1 mL 比例，加入MES缓冲液，在4℃条件下，用带有Teflon碾槌的电动 （或手动）玻璃匀浆器制成匀浆。（4）4℃离心105 000 g，1 h，取上清。（5）加入等体积微管聚合缓冲液，置37℃水浴
抗微管药物实验
组织，剥去脑膜和大血管，剪碎。（2）用冷MES缓冲液洗1-2次。（3）以每克脑组织0.5~1 mL 比例，加入MES缓冲液，在4℃条件下，用带有Teflon碾槌的电动 （或手动）玻璃匀浆器制成匀浆。（4）4℃离心105 000 g，1 h
哺乳动物组织的匀浆实验_基本方案
〜10s。Dounce手动匀浆器：匀浆组织10〜20次。韦林搅切器：匀浆组织3〜4次，每次20〜30s，间隔10〜15%⑤把匀浆液倒入玻璃烧杯，把烧杯放在冰上，在4℃条件下温和搅动匀浆液30〜60min，以便充分提取蛋白。实验提示：匀浆过程中
哺乳动物组织的匀浆实验
，必须在匀浆之前冰冻以利于破碎（常用Ultra-Turrex匀浆器）。培养的哺乳动物细胞和少量的软组织（1〜5g)，比如脑，可以使用Dunce手动匀浆器（Dignam,1990)来匀浆。在所有情况下，都要4℃预冷匀浆器和玻璃容器，并且匀浆操作
细胞和亚细胞提取物的制备实验
哺乳动物细胞和少量的软组织（1~5 g)，比如脑，可以使用 Dunce 手动勻架器（Dignam,1990) 来勻浆。在所有情况下，都要 4°C 预冷匀浆器和玻璃容器，并且匀浆操作应该在冷室中进行。3.将组织加入 3~4 倍体积的匀浆缓冲液
细胞和亚细胞提取物的制备实验
手动勻架器（Dignam,1990) 来勻浆。在所有情况下，都要 4°C 预冷匀浆器和玻璃容器，并且匀浆操作应该在冷室中进行。 3.将组织加入 3~4 倍体积的匀浆缓冲液 B 中，然后转移到匀浆器中。 4.使用下面的方法来制备匀浆
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