一、材料、仪器设备及试剂
1. 材料:植物叶片。
2. 仪器设备:离心机,分光光度计,电子分析天平,恒温水浴,研钵,试管,移液管(1 ml、5 ml)、试管架,移液管架,洗耳球,剪刀。
3. 试剂:10%三氯乙酸,0.6%硫代巴比妥酸(TBA)溶液,石英砂。
二、实验步骤
1. 丙二醛的提取
称取受干旱、高温、低温等逆境胁迫的植物叶片1g,加入少量石英砂和10%三氯乙酸2 ml,研磨至匀浆,再加8 ml10%三氯乙酸进一步研磨,匀浆以4000r/min离心10min,其上清液为丙二醛提取液。
2. 显色反应及测定
取4支干净试管,编号,3支为样品管(三个重复),各加入提取液2 ml,对照管加蒸馏水2 ml,然后各管再加入2 ml 0.6%硫代巴比妥酸溶液。摇匀,混合液在沸水浴中反应15min,迅速冷却后再离心。取上清液分别在532、600和450nm波长下测定吸光度(A)值。
三、丙二醛含量计算:
由于蔗糖-TBA反应产物的最大吸收波长为450nm,毫摩尔吸收系数为85.4×10-3,MDA-TBA反应产物在532nm的毫摩尔吸收系数分别是7.4×10-3和155×10-3。532nm非特异性吸光值可以600nm波长处的吸光值代表。
按双组分分光光度法原理,建立方程组,解此方程组即可求出MDA及可溶性糖浓度。
方程组:
1.按下式计算提取液中MDA浓度
2.按下式计算样品中MDA含量
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