小鼠脾脏T细胞和人PBMCs的体外T细胞活化实验（二）
材料
1X 无菌 PBS
Anti-human CD3:
Clone OKT3 (Functional Grade， eBioscience Cat. No. 16-0037) or Clone HIT3a (Functional Grade， eBioscience Cat. No. 16-0039)
RPMI-1640 完全培养基
无菌 PBMC
96孔平底带盖微孔板
MTT Buffer
MTT 裂解液
仪器用具
微量移液器或排枪
离心机
37°C, CO2 培养箱
96 孔板读板机
实验时间
30 分钟制备 PBMCs
20 分钟设置分析
2-4 天孵育
实验步骤
1、 制备PBMCs并重悬于RPMI完全培养基中，浓度 1-2x106/ml。可根据实验调整细胞浓度至 2-3x106/ml～105/ml。
2、 每孔加 100μl 细胞悬液，每种样品做复孔。
3、 每孔加 100μl 可溶性抗体，优化抗体浓度。若使用分离的 T 细胞做增殖分析，推荐用 10μg/ml 抗体包被在 96 孔板上进行刺激。
4、 放置于潮湿的 37°C, 5% CO2 培养箱中。
5、 孵育 2-4 天。可根据具体的实验进行优化。
6、 每孔加 20μl MTT buffer 再放回至培养箱中孵育 4 小时。
7、 每孔加 50μl MTT 裂解液，轻轻振荡并孵育过夜。
8、 第二天 570nm 读板。
9、 计算平均值和标准方差，作图。
缓冲液和培养基
RPMI-1640 完全培养基：
900ml RPMI-1640
热灭活的 100ml FBS（10%终浓度）
1ml 2-巯基乙醇
10ml L-谷氨酸盐
抗生素混合物（可选）
MTT Buffer：
MTT 贮存液：溶于 1X PBS，浓度为 5mg/ml，避光保存
MTT 裂解液：
20% SDS 50% DMF
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厂商 | 目录号 | 产品名称(简述) | 规格 | 目录价 |
Liankebio | LK-MTT001 | MTT Cell Proliferation Assay Kit | 100assays | 150 |
LK-MTT002 | MTT Cell Proliferation Assay Kit | 200assays | 200 | |
LK-MTT005 | MTT Cell Proliferation Assay Kit | 500assays | 300 | |
LK-MTT010 | MTT Cell Proliferation Assay Kit | 1000assays | 500 | |
LK-CCK801 | Cell Counting Kit-8(CCK-8细胞增殖检测试剂盒) | 100T | 200 | |
LK-CCK802 | Cell Counting Kit-8(CCK-8细胞增殖检测试剂盒) | 200T | 360 | |
LK-CCK805 | Cell Counting Kit-8(CCK-8细胞增殖检测试剂盒) | 500T | 600 | |
LK-CS0006 | Lipopolysaccharides(LPS)脂多糖 | 0.5mg | 90 | |
LK-CS0005 | CONCANAVALIN A(Con A)刀豆素A | 1mg | 90 | |
eBioscience | 85-16-0037-85 | Functional Grade Purified anti-human | 500 ug | 3,840 |
CD3 | ||||
85-16-0039-81 | Functional Grade Purified anti-human | 50 ug | 1,320 | |
CD3 | ||||
85-16-0039-85 | Functional Grade Purified anti-human | 500 ug | 3,840 | |
CD3 | ||||
85-16-0031-81 | Functional Grade Purified Hamster | 50 ug | 780 | |
anti-mouse CD3 (epsilon subunit; CD3e) | ||||
85-16-0031-82 | Functional Grade Purified Hamster | 100 ug | 1,440 | |
anti-mouse CD3 (epsilon subunit; CD3e)
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