高效液相色谱法检测食品中的苏丹染料

2020.1.06

1、范围

本标准适用于食品中苏丹红染料。

本标准规定了食品中苏丹红I、苏丹红II、苏丹红III、苏丹红IV的高效液相色谱测定方法。

该方法的检测限：苏丹红i、苏丹红ii、苏丹红iii、苏丹红iv均为10微克/千克。

2、术语和定义

苏丹红：属于偶氮系列化学合成染料。

3、方法要点

样品萃取用溶剂，固相萃取纯化通过反相HPLC - 紫外可见检测器色谱分析，使用外标。

4、试剂与标准品

乙腈色谱纯

丙酮色谱纯、分析纯

甲酸分析纯

乙醚分析纯

正己烷分析纯

无水硫酸钠分析纯

柱管：1厘米（内径）x 5厘米（高）注射管。

用于色谱法的氧化铝（中性100～200阶）：在105°c下干燥2h，在干燥器中冷却至室温，每100g加2毫升水，混合密封，并放入12h供使用。

氧化铝色谱柱：在色谱柱管底部插入一薄层脱脂棉。将处理后的氧化铝装入处理后的氧化铝中，使其高度达到3cm。轻压实后，加入一层薄薄的脱脂棉，用10毫升正己烷洗涤，柱内用杂质洗涤，备用。

5％丙酮的己烷溶液：用正己烷吸入容积至1L 50ml丙酮。

标准物质：苏丹红I、苏丹红II、苏丹红III、苏丹红IV；纯度（>95%）

标准储液：苏丹红i、苏丹红ii、苏丹红iii和苏丹红iv。0mg（转化为实际含量），溶于乙醚并以正己烷设定容量至250毫升。

5、仪器与设备

高效液相色谱（配有紫外和可见光检测器）

分析天平：0.1mg的量感

旋转蒸发仪

均质机

离心机

0.45μm有机滤膜

6、样品制备

将液体和泥浆样品混合均匀，并研磨固体样品。

操作方法

样品处理

红辣椒粉等粉状样品

称为1g~5g（精确到0。001g）样品加入三角瓶中，10ml～30ml正己烷，超声波5分钟，过滤，用10ml正己烷多次清洗残渣，洗脱无色，与正己烷液体融合。使用旋转蒸发器浓缩至5ml以下，并缓慢加入氧化铝色谱柱为了确保色谱效果，在柱中保持n-己烷液体水平约2mm色谱柱不得在整个色谱过程中干燥。用少量正己烷洗脱浓缩瓶并注入层析柱中。控制氧化铝表面吸附染料的带宽应小于05厘米，流出物是完全液体样品，该样品取决于油通过洗涤塔10毫升〜30毫升己烷多少杂质，直到流出物是无色的，己烷淋浴所有丢弃洗剂，将含有60毫升5％丙酮的己烷溶液洗脱，收集并浓缩，并用丙酮转移到5毫升稀释，被测有机0.45μm的膜过滤器后。辣椒油、火锅、黄油等油性样品0。5g~2g（精确到0。001g）将样品加入小杯中，并加入适量的己烷溶解（约1毫升至10毫升）。不可溶样品可以热溶解在己烷中。按7。1.1“过滤后慢慢加入氧化铝柱进行测试”操作水分含量高的样品，如辣椒酱、番茄酱等。

称取10克〜20克（精确到001克）样品中的离心管中，分散成糊状的溶液中加入10毫升〜20毫升的水，含有更多的水增稠剂样品中，加入30毫升正 - 己烷：丙酮= 3：1均质化5MIÑ ，3000rpm下离心10mi n，n-二己烷吸收层，加入下层20毫升×己烷匀浆，离心，将合并的己烷三次，用无水硫酸钠干燥，加入5克干燥，过滤后旋转蒸发蒸发至干2倍和用于在仪器上保持5分钟后，将残余物溶于5毫升己烷，1.1在按7“被缓慢地加入到氧化铝柱测试⋯⋯过滤”操作。

香肠等肉制品

将压碎的样品在三角瓶中称取10g至20g（精确至0.01g），加入60ml正己烷使样品均匀化5min，滤出滤液，再用20ml×2倍正己烷均匀化过滤。合并三次滤液，加入5g无水硫酸钠脱水，过滤后在旋转蒸发器上蒸至5ml以下。按7.1.1“缓慢充入氧化铝塔，等待测试”操作。

推荐色谱条件

仪器条件

谱柱：c18 3.5μm 4。6毫米x150毫米

流动相：

水溶液A≥0.1%甲酸：乙腈=85：15..

B：乙腈中的0.1％甲酸：丙酮= 80：20

梯度洗脱：

流速:1mL/min

柱温：30℃

检测波长：苏丹红I 478nm；苏丹红II、苏丹红III、苏丹红IV 520nm；苏丹红I峰后切换。