分析测试百科网 > 行业资讯 > 技术原理

电穿孔转染真核细胞实验——植物原生质体细胞

2019.3.26

电穿孔法应用高压电击短暂或稳定地将DNA导人细胞，是一种目前大受好评的方法。它适用于多数类型的细胞，既可产生高频率的稳定转染，又可产生短暂的基因表达，并且由于其所需步骤甚少，因而比其他技术更为容易

实验材料	原生质体细胞
试剂、试剂盒	电穿孔缓冲液原生质溶液
仪器、耗材	尼龙筛网锥形管
实验步骤	1. 将小心切成5 mm 的条状无菌植物材料8 ml 原生质体溶液中温育，置于30℃旋转摇床上3~6 h。从中获取原生质体细胞。 2. 经80 μm 的尼龙筛网滤过除去沉渣，用4 ml 电穿孔缓冲液淋洗筛网。将原生质体细胞并入一个无菌的15 ml 锥形离心管中。 3. 300 g 离心5 min，弃上清。加5 ml 植物电穿孔缓冲液，重复洗涤步骤。按1.5×10⁶~2×10⁶细胞/ml 的密度将原生质体细胞重悬于植物电穿孔缓冲液中。 4. 同哺乳动物细胞一样进行电穿孔转染。开始时可用1~2 KV电圧及3~25 μF电容进行1次或几次电冲击，然后可在此基础上继续优化该体系。 5. 培养48 h 后收集细胞，提取RNA，进行短晳基因表达分析，或选择稳定转化的细胞。

互联网

喜欢作者我要约稿

推荐

推荐作者

热点排行

一周推荐