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Sage Science Pippin HT 简易操作手册

2020.4.27

一 准备样品

样品的前处理:

  1.   DNA 样品的离子强度要比缓冲液的低 

2.  DNA 样品是去蛋白 

3. 上样量不超过 1.5ug

4. 了解待回收的 DNA 片段大小

5.  20ul DNA 样品(TE 溶解)+5ul marker/上样缓冲液(3%、2%、1.5%),混匀

震荡离心。0.75%预置胶 20ulDNA 样品+5ul 上样缓冲液,marker 一个泳道直接 25ul。

二 编程

Protocol Editor 界面下: 1. 选择新建 Protocol 2. 选择预制胶种类 3. 设置回收的片段大小 4. 指定参考泳道(内标/外标) 5. 默认选择“洗提完成后终止”。 

三 光学校正(Pippin HT 校正系数是 0.7)

将光学校正板黑色一面朝下,放到泳道卡槽内,点击“校正”。每次实验前都必须要进行光路校正。 

四 准备预制胶

1 检查预制胶。

a 检查预制胶中缓冲液量,不足加满。

b 检查凝胶柱是否断裂。 

c 检查是否有气泡。

2 准备上样。

a 排除洗提孔后面的气泡。

b 撕掉密封条,将预制胶置于仪器槽内。

c 从上方的每个缓冲液孔中吸走 80ul 缓冲液(3%、2%、1.5%预置胶); 或者吸走 150ul 缓冲液(0.75%预置胶)。

d 清空洗提孔中的缓冲液, 加入 30ul 的新鲜缓冲液 。

e 用胶带封闭洗提孔。

f 检查样品孔溶液,不足时补满至 40ul 。

3 连续性检查(测试电流。连续性跟温度有关系,所以缓冲液要提前从冰箱中拿出进行室温平衡) 。

五 上样

吸掉 30ul 缓冲液,加入 25ul 样品,合上盖。

六 运行程序

七 回收目的片段 


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