邻菲咯啉铁分光光度法测定土壤中的硒
一、方法要点
用硼氢化钾溶液使硒(Ⅳ)还原成H2Se挥发分离出来，用邻菲咯啉铁(Ⅲ)溶液吸收，以分光光度法测定被H2Se还原生成的橙红色邻菲咯啉亚铁来测定微量硒。
二、试剂与仪器
(1)硒标准溶液：将光谱纯硒溶于硝酸，加水配成1mg／mL的硒贮备液，使用时用0.05mol／L硫酸稀释成lμg／mL的硒标准溶液。
(2)硼氢化钾溶液(3％)：将硼氢化钾溶于0．5％KOH的水溶液中，滤去不溶物，贮于聚乙烯瓶中。
(3)硒化氢吸收液：在50mL的乙酸-乙酸钠缓冲液(pH=4)中，加入75mL0．2％邻菲咯啉水溶液及5mL含Fe3+为2mg／mL的硫酸铁铵水溶液，加水至500mL。
(4)盐酸：5mol／L的溶液。
(5)亚铁氰化钾溶液：20％的溶液。
(6)硝、硫混酸：(2+1)硝酸-硫酸的混合液。
(7)分光光度计。
(8)氢化物发生及吸收装置。
三、分析步骤
称取2．5000g100目的干土壤样，置于i50mL锥形瓶中，用水湿润，加硝硫混酸10mL，加热到刚冒SO3白烟，冷却后转移至50mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，吸取试样溶液10mL置于反应瓶中，加1mL20％亚铁氰化钾溶液及15mL5mol／L盐酸，用水稀释至30mL体积后。接好发生装置，在玻璃吸收瓶中装入7mL硒化氢吸收液，连接好发生及吸收装置。在筒形加液漏斗中加入KBH4溶液20mL，盖好塞子，通氮气(或用打气球打气)加压，缓缓开启活塞，把KBH4溶液加入反应瓶中，控制加入速度以保持吸收液气泡升至吸收瓶半球部位，控制在3．5～4min内加完后，鼓气约1min，放置15min后，将吸收液用2cm比色皿，以试剂空白作参比，在波长508nm处，测定吸光度。
四、标准曲线的绘制
取硒标准溶液0.0、2．0、4．0、6．0、8．0、10．0mL，分别加入反应瓶中，加5mol／L盐酸15mL。加水使体积到30mL，在玻璃吸收瓶中装入7mL吸收液，以下按分析步骤进行，测定吸光度，绘制标准曲线。
五、注意事项
(1)反应液酸浓度为1．5～4mol／L时最好。
(2)硼氢化钾液加入量在0．4～0.7gKBH4时为好，每次加入3％的KBH4溶液20mL。
(3)KBH4加入速度太慢或太快都不利于H2Se的逸出和吸收，控制在3．5～4min内加完为好。
(4)显色时间在25℃放置15min颜色可达稳定，24h内吸光度值不变。
(5)水样的测定步骤：取100mL(含硒量小于10μg)水样于瓷蒸发皿中，用KOH调至碱性，加热蒸发至约10mL，将残液转移到反应瓶中，按分析步骤进行。
污水样可在碱性液浓缩后加5mL硝硫}昆合酸消化至清亮，加适量水赶走氮氧化物后测定。
