BHA和BHT混合使用时分离与测定方法
BHA和BHT混合使用时分离与测定方法,分别显色比色法
1.原理
用石油醚提取食品中的BHA和BHT。通过硅胶柱使BHA和BHT分离,BHA与2,6---二氯醌氯亚胺-
硼砂溶液生成兰色。BHT与2,2,---联吡啶---氯化铁溶液生成橘红色发色团,与标准比色定量。
2..试剂
⑴ 0.01% 2,6---二氯亚胺乙醇液,采用无水乙醇配置存于棕色瓶中,冰箱保存可存三天。
⑵硼砂缓冲溶液:取硼砂0.6g氯化钾0.7g, NaOH 0.26g 加无水乙醇至500ml,过滤即可使用。
⑶0.2 % а,а’-联吡啶溶液:称取а,а’-联吡啶0.2g置于烧杯中,加入2ml乙醇,定100ml。
⑷02.%FeCL3溶液:24 小时后重新配置。
⑸30%乙醇液
⑹石油醚 30-60℃
⑺硅胶,柱层析用,不活化。
⑻BHA溶液 称BHA 0.050g→加少量无水乙醇溶解后→转移100ml棕色容量瓶用无水乙醇定容→避光保存→此液为0.5mg/ml临用时取1ml于50ml容量瓶→加无水乙醇定容→为10微克/毫升的BHA
⑼BHT标液:称BHT0.1000g→少量无水乙醇溶解后→定容100ml(用无水乙醇定容)→为1.0mg/ml→取1ml定容100ml(用无水乙醇定容)→为10微克/毫升
3.方法(整个过程要避免光照进行)
1)样品处理
取磨碎样10g→于带塞三角瓶→加石油醚50ml→振摇20分钟→静止后取上层液25ml→通过硅胶柱用石油醚淋洗→收集150ml淋洗液→作为BHT检验液→取出5ml 于蒸发皿中自然挥干→用30%乙醇6ml洗涤滤纸→滤液于洗液合并于比色管→供BHT测定。 无水乙醇淋洗以石油醚淋洗后的硅胶柱,至淋洗液为100ml,供BHT测定。
2) 测定:
a)BHT 的测定:
标准曲线的绘制
取6个比色管编号 1 2 3 4 5 6
分别吸BHT标液 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5
30%乙醇液 ———→1ml←—————————
加0.2%2,2-联吡啶 ———→1ml←———————
暗室中加2,2-FeCl2 ———→1ml←———————
放置60分钟进行比色(波长520nm),绘制标准曲线
样品的测定:取上面BHT测定液20ml→于比色管→加30%乙醇至8ml→加0.2% 2,2---联吡啶1ml→以下按标准曲线绘制
b)BHA的测定
标准曲线的绘制,取6个比色管编号,1 2 3 4 5 6
吸取BHA标液 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5
加无水乙醇 ———→稀释总体积8ml←—
加0.01%2,6-二氯醌氯亚胺 ———→1ml←—
硼砂缓冲溶液 ———→2ml←—————
静止20分钟于620nm测定消光值,绘制标准曲线
样品的测定:取BHA测定液4ml→于比色管→用无水乙醇稀释至8ml→以下同标准曲线的绘制。
4.计算: BHT或BHA(μg/kg)=V/W*V2/V1*C/V3*1000/1000
C-----测定用样液中BHA或BHT的含量(μg)
V-----BHA或BHT混合时的总体积(ml)
V1 ---BHA或BHT分离时的体积(ml)
V2----BHA或BHT分离后的定容体积(ml)
V3----BHA或BHT分离后的测定用量 (ml)
W-----样品重量(g)
1000---将μg换算成 mg
1000----表示单位(将g换成Kg)
5.注意事项:
⑴抗氧化剂本身会被氧化,样品随着存放时间的延长含量会下降,所以样品进入实验室应尽快分
析,避免结果偏低。
⑵抗氧化剂BHT稳定性较差,易受阳光,热的影响,操作时应避光。
⑶用柱层分离含油脂多的食品,会受到温度的影响,室温度低,流速缓慢,使分离效果受一些影
响,最好温度在20℃以上进行分离。