用于脑脊液中多种β淀粉样肽的SPE/LC/MS/MS定量测定方法 四
β淀粉样1-38肽
过量加标浓度 ng/mL | 质控品浓度 | 平均计算浓度 | 标准偏差 | % CV | 重复检测的合格次数 | 平均准确度 |
0.2 | 1.49 | 1.355 | 0.071 | 5 | 3/3 | 90.9 |
0.8 | 2.09 | 1.843 | 0.118 | 6 | 3/3 | 88.2 |
2 | 3.29 | 3.287 | 0.319 | 10 | 3/3 | 99.9 |
6 | 7.29 | 7.701 | 0.478 | 6 | 3/3 | 105.6 |
β淀粉样1-40肽
过量加标浓度 ng/mL | 质控品浓度 | 平均计算浓度 | 标准偏差 | % CV | 重复检测的合格次数 | 平均准确度 |
0.2 | 2.75 | 2.359 | 0.015 | 1 | 2/3 | 85.8 |
0.8 | 3.35 | 3.054 | 0.016 | 1 | 2/3 | 91.2 |
2 | 4.55 | 3.929 | 0.011 | 0 | 3/3 | 86.4 |
6 | 8.55 | 8.209 | 0.5 | 6 | 3/3 | 96 |
β淀粉样1-42肽
过量加标浓度 ng/mL | 质控品浓度 | 平均计算浓度 | 标准差 | % CV | 重复检测的合格次数 | 平均准确度 |
0.2 | 0.663 | 0.655 | 0.07 | 11 | 3/3 | 98.8 |
0.8 | 1.263 | 1.145 | 0.058 | 5 | 3/3 | 90.7 |
2 | 2.463 | 2.403 | 0.121 | 5 | 3/3 | 97.5 |
6 | 6.463 | 5.986 | 0.701 | 12 | 3/3 | 92.6 |
表3：对用3种人源混合脑脊液制备出的质控样品所进行分析的典型结果
结论
1. 我们开发了一种用于同步定量分析人和猴脑脊液中多种β淀粉样肽的SPE-LC/MS/MS生物分析方法并对其进行了验证。
2. 将基于µElution型混合模式SPE的高选择性萃取方法与UPLC色谱分析的分辨率相结合是实现对人和猴脑脊液中3种主要β淀粉样肽进行准确、精确而可靠的定量分析的关键。
3. 正离子MS/MS和b离子序列碎片的使用提供了本应用所需的质谱特异度。
4. 用不到30分钟的时间即可完成对96份样品的萃取并作好进样准备，从而满足了临床前研究所需的样品制备处理通量要求。
5. 本文所述的方法避免了在临床前研究工作中进行耗时的免疫测定或免疫沉淀步骤。
6. Xevo TQ质谱的质量范围和灵敏度允许选择高m/z前体进行破碎并能选择特异度高的b离子碎片，从而增加了此项测定的信噪比并总体提高了其特异度。
7. 此类方法也可允许选择性的、特异性的、并按高通量方式同时测定一份样品中的几种不同β淀粉样肽，而同时仍能达到低浓度内源性β淀粉样肽分析所需的高灵敏度。这是一个明显的优点，因为ELISA测定需要使用多种抗体进行多次测定。
所选择的参考文献
1. T.A. Lanz、J.B. Schachter．神经科学方法杂志，169 (2008) 16-22.
2. T. Oe等．质谱分析中的快速通讯，20 (2006) 3723-3735.
3. JR Slemmon等．色谱分析杂志：生物分析，846 (2007) 24-31.
4. NT Ditto等．神经科学方法杂志，182 (2009) 260-265.
5. T.A. Lanz、J.B. Schachter．神经科学方法杂志，157 (2006) 71-81.
6. MJ Ford等．神经科学方法杂志，168 (2008) 465-474.
7. E. Portelius等．蛋白质组学研究杂志，6 (2007) 4433-4439.
致谢
本文作者希望向Wenlin Li（辉瑞公司PDM部）表达谢意，感谢她在使用免疫亲和LC/MS/MS分析β淀粉样肽所作的前期工作。
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