半自动定氮仪在食品蛋白质含量测定的优势
凯氏定氮法是我国各类食品蛋白质含量测定的标准方法，但是，在实际工作中也存在着一些不尽如人意的地方，最突出的表现在样品消化处理上，消化的温度不仅高而且时间很长，这也就导致了整个测定分析实验的时间长。因此能够快速测定食品蛋白质含量的方法，有着十分重要的意义。
我们根据工作实际及积累的工作经验对这方面的问题进行了一些探讨,选用富含糖类、脂类的速溶奶粉为对象,采用三氯乙酸沉淀法分离出奶粉中的乳蛋白,然后采用甲醛固定法测定出其游离氨基含量,并通过与其凯氏定氮测出的蛋白质含量进行比较,得出了奶粉蛋白质含量与奶粉的游离氨基含量之间的比例关系,结果令人满意,同时避免了样品消化处理等繁琐步骤,达到了快速测定的目的。现将具体的操作简介如下:
1.仪器与试剂:半自动定氮仪、精密pH计,电磁搅拌器、离心机、10%三氯乙酸溶液、0.06NNaOH溶液、36%甲醛溶液、0.05NHCI溶液、2%硼酸溶液、指示剂等以及样品消化用试剂,均采用AR级试剂。
2.方法:取不同厂家、不同批号的奶粉样4个,称取129左右溶解后定容至looml,振荡均匀后按下述处理进行。
2.1凯氏定氮:取sml样品溶液加人15ml浓HZSO;、1.59KZSO一、Zml10%CuSO‘,然后在红外炉上450oC消化处理至完全透明;冷却后消化液定容至100ml,取20ml在蒸馏器上加碱蒸馏,馏出液用2%硼酸吸收并用0.05NHCI滴至终点,平行一次,同时作空白试验。根据测定结果计算奶粉中蛋白质含量(g八009)。
2.2甲醛固定法测氨基:取10ml样品溶液加人到大离心管中,加人10ml三氯乙酸溶液后混匀,放置10min,离心smin(4000转/分);倾去上层清液后,沉淀用50一60ml去C02水,分次将其转移至250ml烧杯中,随后置于电磁搅拌器上并先用0.06NNa0H调节pH至8。
2.再加人20ml甲醛溶液,imin后用o.o6NNa0H调节pH至9.2,并记录其碱消耗体积;平行一次并作空白试验;根据测定数据计算奶粉中氨基含量(mmol/g)。
3.半自动定氮仪测定结果:4个样品的测定结果，将各样品的蛋白质含量除以其氨基含量可以得到结果，可见,在不同的4个样品中蛋白质含量与氨基含量比值差异甚微,平均为1.835(S=0.0049,C,=0.27%),说明了奶粉中蛋白质的含量与其甲醛法测定出的氨基含量成正比,因而也表明了在实际工作中直接利用甲醛固定法测定蛋白质含量是可行的。若直接利用1.835的常数与表2中的结果相乘则可计算出4个样品的蛋白含量分别为(g/g):0.1879、0.2147、0.2019、0.1237，结果几无差别。
通过半自动定氮仪以及其它相关试剂的测定分析，我们可以总结出，在利用0.05一0.06NNa0H溶液进行测定1.29样品的游离氨基时,即使是滴定误差为土0.04ml,其蛋白质含量的误差也只有士0.0049/g,基本可以满足一般分析的耍求,但是与凯氏定氮法相比却省去了消化处理,而且由于利用三氯乙酸沉淀分离出乳蛋白,可以除去一些杂质的干扰,因此不仅省时省力,且其结果更准确可靠。
