丝瓜提取物对衰老小鼠学习记忆力、脑组织形态...（一）
丝瓜提取物对衰老小鼠学习记忆力、脑组织形态学及免疫功的影响
目的:观察丝瓜提取物对衰老小鼠学习记忆能力、脑组织形态学及免疫功能的影响。
方法:经筛选的昆明种小鼠随机分为对照组、衰老组、ALL瓜提取物187.5 mg/kg,375 mg/kg,750 mg/kg3个剂量组。除对照组以外，均在颈背部皮下持续注射D伴乳糖复制衰老模型，利用跳台实验及Morris水迷宫测试各组小鼠学习记忆能力，脏体比方法测定各组小鼠脑指数、胸腺指数和脾脏指数，ELISA法检测各组小鼠血清中细胞因子ILK, IFN、的浓度和T淋巴细胞增殖活性，HE染色法观察各组小鼠脑组织形态学变化。结果:衰老组在跳台实验的能力测试中错误次数增多;在水迷宫测试中逃避潜伏期延长，平台象限游泳时间缩短，穿越平台次数减少;脑组织细胞数量明显减少;脑指数、胸腺指数和脾脏指数减少;IL 2,IFN、水平和T淋巴细胞增殖活性降低;与衰老组比较，丝瓜提取物(375 mg/kg,750mg/kg)可明显拮抗上述指标变化。结论:丝瓜提取物可以改善衰老小鼠的学习记忆，同时增加机体免疫活性，达到延缓衰老进程的作用。
关键词 丝瓜提取物;衰老;;D-半乳糖;学习记忆能力;形态学
衰老是分子、细胞、器官乃至整个机体功能衰退的复杂的生理、病理变化过程。学习和记忆能力减退是脑功能衰退的表现，其机理是氧自由基介导的脂质过氧化效应。丝瓜系葫芦科植物具有丰富的营养价值。有报道丝瓜提取物有抗应激、抗病毒、促进生长及增强免疫等功能。有研究显示丝瓜的果、叶和藤的提取物可增强正常小鼠腹腔巨噬细胞内酸性磷酸酶的活性以及巨噬细胞吞噬功能的作用。证明丝瓜提取物对正常小鼠免疫功能的影响。丝瓜中分离得到的黄酮类物质可能是其发挥体内抗氧化作用的主要物质。而丝瓜提取物对衰老模型小鼠的免疫调节作用还少见报道，实验主要观察丝瓜提取物对D-半乳糖致衰老小鼠行为记忆及免疫调节的影响。
材料与方法
1. 1试验药物 丝瓜提取物为比例提取物，由西安森冉生物有限公司提供，通过80目筛，棕黄色精细粉末，1g提取物相当于15g生药。脑复康(毗拉西坦片)，购自上海信谊药厂有限公司，批号:201309030
1.2动物 选取72只雄性昆明种小鼠，SPF级，体重25 -35g，许可证号:SCXK(预)2010-00020
1.3试剂 D-半乳糖(上海试剂二厂);RPMI-640培养液(上海元龙生物技术有限公司)
1.4仪器 XR-3TB小鼠跳台分析系统(上海欣软信息科技有限公司)，XR-XM101 Morris水迷宫(上海欣软信息科技有限公司)，高速冷冻离心机(上海创赛科学仪器有限公司)，酶标仪(ELX一80型)，紫外可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)，C02培养箱(BPN-150CH)。
1.5方法 小鼠按体重随机分为正常组、模型组、丝瓜提取物187.5 mg/kg,375 mg/kg,750mg/kg剂量组;除正常组外，其余各组小鼠颈背部皮下注射D伴乳糖150mg/kg，连续8周，诱导衰老模型;同时，阳性对照组小鼠灌胃给予脑复康800mg / kg、分别灌胃给予187.5 mg/kg,375 mg/kg,750mg/kg剂量的丝瓜提取物，同时正常组和模型组小鼠给予等体积的0. 9%生理盐水灌胃。8周后，对各组小鼠的学习记忆能力进行测试。
1. 5. 1跳台实验 待环境适应3min后取出，箱底通以36V的交流电，其正常反应是跳到平台上以躲避电击，将小鼠放入绝缘平台上，动物从跳到平台上至第1次跳下的时间为潜伏期和5min内受电击的次数(错误次数)，记录为学习前潜伏期和错误次数，作为小鼠的学习成绩;24h后，重复操作一次，记录学习后潜伏期和错误次数，作为小鼠的记忆成绩。
1.5.2Morris水迷宫定位航行实验及空间探索实验 水迷宫的水池分为4个象限，迷宫上方安置着连接显示系统的摄像机，同步记录小鼠运动轨迹。实验过程中水池周围的参照物保持不变。实验分为前5天的定位航行实验与第6d的空间探索实验。(1)定位航行实验:历时5天，每天1次。分别从四个象限将小鼠头朝池壁入水，自动摄像系统和计算机分析处理系统处理，记录小鼠120秒内找到平台的时间(即逃避潜伏期)。超过120秒找不到平台，可引导其找到平台，滞留平台15秒，逃避潜伏期记成120秒。(2)空间搜索实验:第6天撤去平台，小鼠随机在一象限而向池壁放入水中，之后入水均固定于此象限，记录120秒内平台所在象限的游泳时间和穿越平台次数。
1.5.3小鼠脑、胸腺和脾脏指数测定 学习记忆实验结束后，准确称其体质量后脱颈椎处死小鼠，超净工作台中无菌取出全脑、胸腺和脾组织，用预冷的生理盐水反复冲洗，用滤纸吸干后，用电子天平称其重量，训一算各脏器指数，脏器指数=脏器质量( mg)/小鼠体重(g)
1.5.4 T淋巴细胞转化实验 处死小鼠后，按常规无菌操作取小鼠脾脏制备成脾细胞悬液，调整细胞浓度为1 x 10} /ml。在96孔细胞培养板的每孔加脾细胞0. 2m1， ConA 15ul，其终浓度为6ug/ml，1个样品设3个复孔，以不加ConA为对照·加盖置入5 % C02。 37℃条件下的培养箱中培养72h。在酶标仪波长560nm处测A值，计算刺激指数(SI)=实验孔A值/对照孔A值。
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综述
