ADC 单抗药物的分子量、氨基酸序列、糖基化位点以...（三）
经过 Protein Deconvolution 2.0 软件去卷积处理之后的单抗分子量分布图如下所示（图 4），根据单抗的氨基酸理论序列分子量进行计算，将观察到的质谱峰进行归属，从图中我们观察到，该 ADC 单抗分子之间存在 956 Da 左右的质量增加，由此推断该单抗分子结合了不同数目的分子量在 956 Da 左右的药物小分子，并且最多可以检测到 6 个药物小分子的结合。同时还观察到 160 Da 左右的质量增加，这主要是由于连接基团的存在引起的。从而初步推断该 ADC 单抗药物主要结合了 6 个 ADC 小分子药物，该结果与理论值基本一致，同时根据质谱峰的峰强度信息，我们还可以计算得到该药物的 ADR 值，该数值对于 ADC 药物的有效性评估至关重要。
图 4. Q-Exactive 质谱采集的 ADC 单抗原始质谱图经过 Protein
Deconvolution 2.0 软件去卷积处理之后的单抗分子量分布图
（D0–D6 表示不同 ADC 药物小分子结合的单抗变体，蓝色圆圈表示连接基团对应的质谱峰。）
3.2 氨基酸序列、糖基化位点和 ADC 药物结合位点鉴定
3.2.1 氨基酸序列覆盖
通过 trypsin 酶解后的肽段，在 Q-Exactive 质谱上采集到的色谱质谱流出图如图 5 所示，再经过 SEQUEST 数据库搜索后，ADC 单抗重链的蛋白序列覆盖度为 90.24 %，如图 6（A）所示，轻链的蛋白序列覆盖度为 100 %，如图 6（B）所示，其中未鉴定到的氨基酸序列主要是由于缺乏酶切位点和酶切后肽段较短造成的，为了实现 100% 的氨基酸序列覆盖，可以通过选择其它内切蛋白酶来实现。
图 5. ADC 单抗药物的 Trypsin 酶解肽段的色谱质谱流出图
图6. ADC 抗体药物经过 trypsin 酶解和 Q-Exactive 质谱实现的氨基酸序列覆盖度示意图。（A 为重链氨基酸序列覆盖示意图，B 为轻链氨基酸序列覆盖示意图，其中绿色标记的氨基酸序列表示该段序列鉴定的可靠性非常高，达到 99% 以上，红色标记的氨基酸序列表示该段序列鉴定的可靠性为 95% 以下，无颜色标记的氨基酸序列表示该段序列没有被鉴定到，氨基酸序列上方的数字代表氨基酸的位置。）
