AAV（腺相关病毒）的结构及生产过程介绍
在日常生活中，我们经常听到或者亲身参与到各种“圈”中，例如，时尚圈，娱乐圈，艺术圈，还有上海的各大商圈和可食用的甜甜圈，当然，对大多数人来说最熟悉的莫过于微信朋友圈了。话说，在基因治疗领域也有一个圈，小编暂且给它取名叫“病毒载体圈“，此圈中有这样一位傲娇的明星大咖，它不仅理化性质独特（可耐受冻融、65℃高温及多种有机溶剂），而且身怀绝技，同时有着极强的可塑性（分12种血清型和100多种突变体），深受广大科研和医学工作者的青睐。在如今的生命科学领域，追求它似已蔚然成风，那这位“病毒载体圈”的神奇新秀到底是谁呢？
它，就是腺相关病毒（Adeno-Associated Viral Vector，AAV）。
AAV最初是在纯化的腺病毒液中发现的一种污染成分，故而得名。其复制增殖需要腺病毒或者疱疹病毒等辅助病毒的协助，所以AAV是一种复制缺陷型的病毒，归属于细小病毒科依赖病毒属。AAV是无包膜的单链线状 DNA 病毒，其基因组约4.7kb，两末端为反向末端重复序列（inverted terminal repeat sequence, ITR），ITR 序列之间为病毒蛋白编码区，包含两个开放阅读框架，产生复制蛋白Rep、衣壳蛋白Cap和包装激活蛋白AAP。
图1 AAV基因组的结构
AAV作为最早通过欧盟FDA认证的基因治疗载体，因其具有宿主范围广、非致病性、低免疫原性、长期稳定表达外源基因、良好的扩散性能和物理性质稳定等优点，已被广泛地应用于基础研究和临床试验中。而且，越来越多的临床试验证明了AAV载体的有效性和良好的安全性，使之成为基因治疗研究的热点，并被认为是介导基因治疗的理想载体之一。那么，如此受欢迎而又自带明星光环的AAV究竟从何而来？本期，小编就为大家带来AAV“诞生”的那些事。
在病毒型基因传递系统中，有一个很大的顾虑就是辅助质粒和载体质粒发生重组而恢复出野生型病毒。目前大多数生成重组腺相关病毒（rAAV）的实验方案均需要共转染一个载体质粒和一个表达病毒复制和结构基因的包装质粒到腺病毒(Ad)感染的培养细胞中。这无疑增加了野生型AAV产生的可能性。
吉凯的AAV生产只要有质粒和细胞就够了！我们的“AAV Helper-Free System“由病毒载体、pAAV-RC载体和pHelper载体三种质粒组成。其中，pAAV-RC载体质粒包含了AAV编码复制蛋白和病毒衣壳蛋白的rep和cap基因；pHelper载体质粒提供了生产具感染性的AAV病毒颗粒所需的腺病毒基因产物（例如： E2A,E4和VA RNA 基因）；其余的腺病毒基因产物则由稳定表达腺病毒E1基因的宿主细胞提供。该包装系统的最大优点就是不用加辅助病毒，一方面，排除了辅助病毒对rAAV的污染；另一方面，减少了野生型AAV产生的可能，进一步提高了AAV产品的安全性。
图2 AAV的生产示意图（原创）
吉凯生产的AAV产品能够保证动物试验所需的rAAV基因载体的质量和产量。如果，你是正热衷投身于AAV研究的科研迷，如果你和你的科研小伙伴还在为选择何种AAV而苦恼？不要再犹豫了，欢迎关注上方微信公众号，吉凯可以为你的一万个为什么答疑解惑！我们有专业的科研团队和优质的技术服务，诚邀与您的合作！
