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腺相关病毒(AAV)技术快速入门手册(一)

2020.5.26

腺相关病毒(AAV)作为一种安全、持久、高效、高特异性的基因操作工具,在生物学特别是神经生物学领域中被广泛使用。许多新手对于AAV的使用往往是知其然而不知其所以然。这篇短文将以图文结合的形式争取让大家在最短的时间内全面了解这种病毒工具。

什么是AAV?

野生型AAV是一种复制缺陷型微小病毒,需要腺病毒或疱疹病毒帮助其在体内复制扩增。而我们做实验用的是不需要辅助病毒的重组AAV病毒(rAAV)。将目的基因的CDS区序列或者RNAi干扰序列插入rAAV表达质粒中,包装病毒,然后直接使用rAAV感染细胞就能完成目的基因操作。

什么时候用rAAV?

当我们需要对特定基因进行过表达或干扰时,特别是做动物实验的时候,就可以使用rAAV病毒。针对不同的实验需求,下表可以帮助您选择合适的病毒工具。

rAAV的优点是什么?

1.安全性高,目前还没有发现AAV对人体致病;每10个人中就有8个人在一生中会感染AAV,而rAAV更是去除了96%的AAV基因组,进一步确保了安全性。目前唯一通过欧盟药监局的基因治疗药物Glybera也是一种rAAV。

2.免疫原性低:当AAV用局部大剂量感染肌肉、脑、眼等组织时,很少有感染上的细胞之后被免疫系统所清除。这种特性对于动物实验上显然极有帮助。

3.感染谱广:几乎所有处于分裂期和静止期的细胞都可以使用AAV来感染。

4.表达时间长:rAAV可在宿主细胞中形成附加体(episome)存在于细胞核中,在细胞分裂不旺盛的组织中可持续表达5个月以上。

5.扩散性强:rAAV具有远高于腺病毒和慢病毒的扩散性,可以穿透血脑屏障,是最理想的神经元和胶质细胞感染工具。

6.高稳定性:rAAV病毒可使用冰袋运输,并且对氯仿等试剂具有抗性

7.特异性强:rAAV有十数种常用的血清型,不同的血清型对不同的脏器有较高的识别及感染能力。


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