腺相关病毒（AAV）技术快速入门手册（二）
rAAV的局限性有哪些？
1.体外实验表达水平较低：主要是因为rAAV病毒的基因组是单链DNA，在体外环境形成双链并转录翻译外源基因的效率非常低。可以在体外水平感染rAAV病毒的同时感染辅助病毒比如Ad5型腺病毒或者终浓度10~50mM的丁酸钠等方法提高细胞实验的rAAV表达量。
2.需较长时间开始表达：同样是需要从单链DNA变成双链DNA，rAAV在感染后需要较长的时间来表达外源基因，所以rAAV感染后建议至少1周后做切片观察。
怎么选择合适的rAAV血清型？
目前文献中使用最多的rAAV血清型包括2,5,8,9。这几种血清型基本涵盖了所有组织和脏器的特异性感染，吉凯基因也可以提供这些常用血清型的rAAV改造和包装服务。下图是常用血清型所对应的组织脏器总结：
怎样实现器官/细胞特异的表达？
很多时候我们需要在特定的器官/细胞中表达外源序列而不影响其他脏器，这时我们有以下几种策略：
1.局部注射，顾名思义就是直接在想表达的地方注射rAAV就可以了，适合器官水平特异感染，容易操作。
2.使用组织/器官特异启动子来表达外源基因包装rAAV，此类rAAV即使感染了其他组织也由于特异性启动子而不会在其他组织中表达。
3.Cre-on，Flex，DIO，double floxed这些技术名称经常在文献中被提及，其实都是一回事，就是使用Cre-Loxp系统，经过两次染色体重组在特定脏器中表达外源基因。前提是我们需要获得特定的Cre小鼠后才可以使用这个技术。Cre-on系统的技术原理如下：
吉凯基因可以提供适合各种器官/细胞特异表达的rAAV工具满足实验需求。
体内使用rAAV的操作注意点有哪些？
1.小鼠的操作通过尾静脉注射的rAAV量推荐在10E11~12v.g数量级，体积推荐在100~200ul；针对脑部的感染建议用量参考下表：
2. 在实验过程中稀释病毒产品的等渗溶液没有其他特殊要求，常规的动物试验用等渗溶液即可，如PBS、生理盐水等。
体外使用rAAV的操作注意点有哪些？
1.胰酶会破坏细胞表面的rAAV病毒受体，因此需要在胰酶消化12h后再进行rAAV感染操作。
2.如感觉rAAV感染效果不佳，可尝试去除血清。
3.rAAV与细胞的吸附过程非常迅速，需要实现混匀后再处理细胞，不然会出现局部未被感染的情况。
4.rAAV感染不需要添加慢病毒助感染试剂诸如polybrene等。
用完后怎么处理？
对AAV最有效的消毒剂是新鲜配制的1%次氯酸钠溶液：
1. 配制时，将84消毒液原液加水稀释
2. 浸泡15 min以达到消毒目的
3. 可以用它处理可回收的物品如玻璃器皿或是污染废液（终浓度是1%），但如果是不锈钢器物切不可直接擦拭，否则会引起表面腐蚀。
其他的处理方式包括用2%戊二醛溶液或是0.25% SDS溶液，还可以121℃高温消毒1小时。
