一、仪器和试剂：
1、仪器：电泳仪（满足稳压500V）、离心机、垂直板电泳槽、钳子、5ml、10ml移液管、微量进样器、聚丙烯离心管。
2、试剂：尿素，乙醇，甘氨酸，甲基绿，三氯乙酸，冰乙酸，过氧化氢，硫酸亚铁，抗坏血酸，α-氯乙醇。
3、药剂配制：
（1）蛋白质提取液：
小麦：0.05克甲基绿溶于25毫升α-氯乙醇中，加蒸溜水至100毫升。低温保存。
大麦：0.05克甲基绿溶于20毫升α-氯乙醇中，加入118克尿素，再加入1毫升β-巯基乙醇，加蒸溜水至100毫升。低温保存。
（2）电泳缓冲液：0.4克甘氨酸加蒸溜水溶解，加4毫升冰乙酸，定容至1000毫升。低温保存。
（3）凝胶缓冲液：1.0克甘氨酸加蒸溜水溶解，加20毫升冰乙酸，定容至1000毫升。低温保存。
（4）0.6%过氧化氢：30%过氧化氢2毫升，加蒸溜水至100毫升。低温保存。
（5）染色液：0.25克考马斯亮蓝加25毫升无水乙醇溶解，加入50克三氯乙酸，加水至500毫升。
（6）凝胶液：丙烯酰胺20克，甲叉双丙烯酰胺0.8克，尿素12克，硫酸亚铁0.01克，抗坏血酸0.2克，用凝胶缓冲液溶解并定容至200毫升。低温保存。
二、实验步骤：
1、样品提取：
一般每个样品测定100粒种子，若更准确地估测品种纯度，则需更多的种子。如果分析结果要与某一纯度的标准值比较，可采用顺次测定法（sepuential testing）来确定，即50粒作为一组，必要时刻连续测定数组，以减少工作量。如果只鉴定真实性，可用50粒。
取小麦或大麦种子，用钳子逐粒夹碎（夹种子时最好垫上小片清洁的纸，以便于清理钳头和防止样品之间的污染），置1.5毫升离心管中，加入蛋白质提取液（小麦0.2毫升，大麦0.3毫升）充分摇动混合，在室温下提取24小时，然后在18000×g条件下离心15分钟。取其上清液用于电泳。
2、凝胶制备：
从冰箱中取出凝胶溶液和过氧化氢液，吸取10毫升凝胶溶液，加1滴0.6%过氧化氢，摇匀后迅速倒入封口处，稍加摇动，使整条缝口充满胶液，让其在5-10分钟聚合封好。
吸取45毫升凝胶溶液，加3滴0.6%过氧化氢，迅速摇匀，倒入凝胶板之间，马上插好样品梳，让其在5-10分钟内聚合。
3、进样：
小心抽出样品梳，将玻璃板加在电泳槽上，用滤纸或注射器吸取样品槽中多余的水分，然后用微量进样器吸取10-20μl样品加入样品槽中。
4、电泳：
在前后槽注入电极液，前槽接正极，后槽接负极。然后打开电源，逐渐将电压增到500V电泳时，要求在15-20℃温度下进行。电泳时间一般为60-80分钟，具体时间可按甲基绿迁移时间来推算，电泳时间为甲基绿移至前沿所需时间的2-2.5倍。
5、染色：
将胶板小心的取下，在染色液中染色1-2天。一般情况不需要脱色，但为使谱带清晰，可用清水冲洗。
三、鉴定：
谱带命名可采用相对迁移率法，或电泳程式法。根据醇溶蛋白谱带的组成和带型的一致性，并与标准样品电泳图谱比较，坚定种子真实性以及测定品种纯度。 展开 | 
