盐酸平阳霉素的鉴别检查方法
鉴别
(1)在含量测定项下记录的色谱图中,供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。(2)取本品适量,加水溶解并稀释制成每1ml中含0.04mg的溶液,取10ml,加3%硫酸铜溶液o.05ml,照紫外可见分光光度法(通则0401)测定,在242nm与291nm的波长处有最大吸收3)本品的水溶液显氯化物鉴别(1)的反应(通则0301)。
检查
酸度取本品,加水制成每1ml中约含4mg的溶液,依法测定(通则0631),pH值应为4.5~6.0溶液的澄清度与颜色取本品5份,各10mg,分别加水2ml使溶解,溶液应澄清无色;如显浑浊,与1号浊度标准液(通则0902第一法)比较,均不得更浓;如显色,与黄色或黄绿色2号标准比色液(通则0901第一法)比较,均不得更深有关物质照高效液相色谱法(通则0512)测定。供试品溶液取本品适量,加水溶解并稀释制成每1ml中含2.0mg的溶液。对照溶液精密量取供试品溶液2ml,置100ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀。系统适用性溶液取盐酸平阳霉素两份,每份约8mg,份加1mol/L盐酸溶液1.0ml,另一份加30%过氧化氢溶液1.0ml,摇匀,放置1小时后,混合,加水2ml,摇匀,得每1ml中约含盐酸平阳霉素2.0mg及其酸降解物(约含10%)或其氧化降解物(约含15%)的混合溶液。色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以已烷磺酸钠溶液(取己烷磺酸钠η.53ε与乙二胺四醋酸二钠72g,加0.08mo/L醋酸溶液使溶解并稀释至10ml,用氨溶液调节pH值至4.3)为流动相A,以甲醇-乙腈(7:3)为流动相B,按下表进行线性梯度洗脱;检测波长为254nm;进样体积为20l时间(分钟)流动相A(%)流动相B(%)30系统适用性要求系统适用性溶液色谱图中,出峰顺序为酸降解物峰、平阳霉素峰、氧化降解物峰(相对保留时间分别约为0.94、1.0、1.1),平阳霉素峰的保留时间约为20分钟;酸降解物峰与平阳霉素峰之间的分离度应大于1.0,平阳霉素峰与氧化降解物峰之间的分离度应符合要求。测定法精密量取供试品溶液与对照溶液,分别注入液相色谱仪,记录色谱图。限度供试品溶液色谱图中如有杂质峰,最大杂质峰面积不得大于校正后对照溶液主峰面积的3.5倍(7.0%),其他单个杂质峰面积不得大于校正后对照溶液主峰面积的2.5倍(5.0%),各杂质峰面积的和不得大于校正后对照溶液主峰面积的7.5倍(15.0%),小于对照溶液主峰面积0.025倍的峰忽略不计。(对照溶液主峰面积除以供试品的含量,即为校正后的对照溶液主峰面积)。干燥失重取本品,以五氧化二磷为干燥剂,在60℃减压干燥至恒重,减失重量不得过6.0%(通则0831)铜盐照紫外-可见分光光度法(通则0401)测定供试品溶液取本品约15mg,精密称定,置10m量瓶中,加0.1mol/L盐酸溶液3ml使溶解,加入3%阿拉伯胶溶液0.4ml,摇匀,再加二乙基二硫代氨基甲酸钠试液2ml,用0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度,摇匀。对照溶液精密量取铜对照溶液[精密称取硫酸铜(CuSO4·5H2O)1.965g,置1000m1量瓶中,加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取5ml,置500mI量瓶中,用0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度。每1ml中含铜005mg]3ml,置10ml量瓶中。自“加入3%阿拉伯胶溶液0.4m”起,制备方法同供试品溶液。 空白溶液精密量取0.1mol/L盐酸溶液3ml,置10ml量瓶中。自“加入3%阿拉伯胶溶液0.4m”起,制备方法同供试品溶液。测定法以空白溶液作为空白,取供试品溶液与对照溶液,在450nm的波长处分别测定吸光度。限度含铜量不得过0.1%。异常毒性取本品,加氯化钠注射液制成每1ml中含2mg的溶液,依法检查(通则1141),观察7天,应符合规定。(供注射用)细菌内毒素取本品,依法检查(通则1143),每1mg盐酸平阳霉素中含内毒素的量应小于5.0EU。(供注射用)降压物质取本品适量,依法检查(通则1145),剂量按猫体重每1kg注射盐酸平阳霉素0.3mg,应符合规定。(供注射用)
