支气管哮喘小鼠气道反应性无创检测方法的建立（三）
五 、 气道反应性的检测
实验第 32 天 , 首先 , 连接好 B u xco 无创肺功能仪并定标 。将自然状态下的 BALB/ c 小鼠置入体描箱中 ,先测定基础 Pe n h 值 ; 随后用 Mc h 激发 , 浓度由低到高依次为 0 、 0 . 20 、 0 . 39 、 0 . 78 、 1 . 56 、 3 . 12 、 6 . 25 、12 . 5 、 25 和 50 g/ L ,记录此时的 Pe n h 值 ,每次雾化吸入 2 mi n ,记录3 mi n 。 有创组则是将小鼠行气管插管后用 B u xco 有创肺功能仪测定其 RL 值 。
六 、 气道炎症
气道反应性检测后行支气管肺泡灌洗 ( PB S 0 . 8 ml × 3 次) , 回收支气管肺泡灌洗液 , 离心 , 细胞沉淀重悬 ,取部分计算细胞总数 ,余下部分制备涂片 , H E 染色后行细胞分类计数 , 每张涂片计数 400 个细胞 , 记录各种细胞数目。
七 、 统计学处理
实验结果以 Š x ±s 表示 ,为进行无创组和有创组气道反应性相关分析 , 分别将每个 Mc h 激发浓度下的Pe n h 与 RL 组转换为与 N S 激发的基础值的百分比 ( Mc h 激发的 Pe n h 值或 RL 值/ N S 激发的 Pe n h 值或 RL值 × 100 %) 来表示 。 采用 SPSS 11 . 0统计软件分析 ,两组样本均数进行 t 检验或相关分析 , P < 0 . 05 、P <0 . 01表示差异有统计学意义 。
结 果
一 、 小鼠的气道反应性
小鼠在各浓度级 Mc h 激发下 ,各组 RL 变化各异 ,具体见表 1 。Penh 升为基础水平 2 倍时的 Mch 浓度定为 PC 100 。 无创哮喘组 PC 100 均 ≤ 6. 25 g/ L ,对照组 PC 100 均 ≥ 12. 5 g/ L 。 具体分布见表 2 。无创哮喘组 Lo g2( 10 PC100 ) 值 ( 5 . 36 ± 0 . 84) 显著低于对照组 ( 7 . 97 ± 0 . 82) ( P < 0 . 01) 。
表 1 各浓度级 Mch 激发下各组的平均气道阻力
组别
Mch ( g/ L)
基线 生理盐水 0 . 20 0 . 39 0 . 78 1 . 56 3 . 12 6 . 25 12 . 50 25 . 00 50 . 00
无创对照组 0 . 48 0 . 45 0 . 46 0 . 49 0 . 45 0 . 52 0 . 52 0 . 54 0 . 77 1 . 39 2 . 03
无创哮喘组 0 . 45 0 . 46 0 . 52 0 . 49 0 . 52 0 . 65 0 . 96 1 . 38 2 . 41 3 . 90 5 . 25
有创对照组 1 . 57 1 . 61 1 . 68 1 . 85 2 . 21 2 . 41 2 . 61 3 . 22 4 . 07 5 . 05 6 . 81
有创哮喘组 1 . 78 1 . 84 2 . 05 3 . 12 3 . 90 4 . 14 5 . 14 5 . 85 7 . 10 8 . 83 11 . 01
注 : Mch : 乙酰甲胆碱
表 2 无创哮喘组和无创对照组 PC100 分布
组别
PC100 ( g/ L)
0 . 00 0 . 20 0 . 39 0 . 78 1 . 56 3 . 12 6 . 25 12 . 50 25 . 00 50 . 00
无创哮喘组 ★★ ★★ ★★★★★★
无创对照组 ★★★ ★★★ ★★
注 : “★ ” 个数表示 PC100 分布数目
用无创方法测得的小鼠气道反应性如图 2 所示 ,其气道反应性是以小鼠在 NS 激发下的 Penh 值为基准 ,取其他各个浓度级 Mch 激发下的 Penh 值与其百分比来反映。 对于用有创方法测得的 R L 值也是用类似的方法转换成比值来表示。 两种方法(无创与有创) 分别测定的模型组与对照组的气道高反应性结果见图 2 、 图 3 。 将无创哮喘组和有创哮喘组的气道反应性相应值行两样本的 t 检验 ,得 P > 0. 05 。
