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PCR(聚合酶链式反应)反应方法--热启动方法

2021.12.28

  热启动PCR的方法是在反应温度降至80ºC时添加Taq DNA聚合酶,以保证高特异性PCR产物的合成。

  1.如基本的PCR方法所述,添加所有的PCR反应的混合物,但不加Taq DNA 聚合酶。

  2.将小管中的混合物混匀,并加入50 µl矿物油或硅化油覆盖之。

  3.盖紧小管,短暂离心,以便于PCR混合物沉于管底。

  4.小管在PCR仪中94ºC温育3分钟,以使模板DNA完全变性。

  5. 94ºC温育后,维持PCR反应在80ºC。

  6.每一PCR反应管添加0.5 µl (2.5 U)的 Taq DNA 聚合酶,注意应保证酶加入到油下面的PCR混合物中。

  7.按照基本的PCR方法所述,继续完成25-35个循环的变性、退火和延伸。


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