实验室分析方法--免疫亲和萃取的过程方法及应用举例
通常的亲和色谱主要用于蛋白质分子的净化。它的具体过程如下：能和目标蛋白质分子亲和的基质（又称亲和物）以共价键的方式与不溶性的固定相键合（一般要通过一个连接剂作为中介）；然后利用有选择性的亲和力与目标蛋白质（某一个或某一类）的活动中心可逆性地结合；被分离体系中其他蛋白质被淋洗出；再通过某些方式把已经结合的目标蛋白质释放出来，这种分离和净化蛋白质的方法称为亲和色谱法。
现在把抗体以共价键方式键合到分离柱的固定相上，用它可逆性地结合该抗体所对应的抗原，由此在一个很复杂的体系中快速、有效地萃取浓度很低的小分子目标抗原，这就是免疫亲和萃取法（IAE）。由于抗体和抗原是高度选择性的结合，可以把它们看作锁体和钥匙的关系，也就是一把钥匙配一把锁的选择性。这样，既可萃取又可浓缩的IAE是目前最为有效的纯化方法，并且使紧随后面的检测达到低于10-9的灵敏度。实际上IAE也可以用来对目标蛋白质进行纯化，只需把抗原结合在固定相上即可。
不过，实施这一方法时也应注意到以下几个方面，即避免抗体与目标物的类似物相结合而影响选择性和结果的不准确，因而要提高抗体的纯度；另外大的容量和柱的耐用性也需考虑。后者涉及IAE柱所使用的固定相材料，它应由一种均一的、并具有化学和生物惰性的多孔刚性粒子构成，能够耐受相当的压力和流速，例如HPLC/MS在线联用系统中，能承受6.9MPa (1000psi)压力和2〜4mL/min的流速。
图是IAE应用的一个例子。康力龙(stanozolol)是一种促蛋白激索，用作甾体类兴奋剂。使用IAE法纯化康力龙的效果可由GC/MS测试结果所见。图是尿样中常规的溶剂萃取康力龙后的GC/MS测定结果，由于高的本底，在总离子流图上几乎看不到它的色谱峰；(2)是尿样经过更为合适的溶剂萃取，如固相萃取，可以降低本底信号为原来的1/5; (3)是使用IAE萃取后本底信号降低为原来的1/50。尿中低浓度的康力龙被IAE萃取而浓缩，在尿中其他组分被洗脱的前提下降低了 GC/MS的检测本底，从而突出了它的信号强度。
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