睾丸间质细胞（LCs）m6A修饰提供新治疗靶点在不育症...-1
睾丸间质细胞（LCs）m6A修饰提供新治疗靶点在不育症治疗方向的应用
文章导读
m6A是真核生物中最常见的一类RNA修饰，目前已有的研究表明m6A在加速mRNA代谢和翻译，以及在细胞分化、胚胎发育和压力应答等过程中起重要作用。这一次，研究重大发现m6A修饰在“人类繁衍”中也发挥着重大意义，该方向的发现将会吸引着更多的科研工作者探究在m6A与“不孕不育”的密切联系。云序生物一直关注m6A研究动态，今天为大家带来的文章刚好揭示了m6A修饰调节睾丸间质细胞发育的过程。
2020年1月31日，m6A调节睾酮合成一文发表在Autophagy （IF=11.059）期刊上，该文章采用多组学联合应用技术检测睾丸间质细胞（LCs）m6A甲基化修饰，这项研究揭示m6A 甲基化在LCs中调节睾酮合成中的作用，通过利用m6A 甲基化研究作为无精子症和少精子症的治疗靶点，为新的治疗策略提供了方向。
发表期刊：Autophagy
影响因子：11.059
发表时间：20200131
实验方法：MeRIP-seq, RNA-seq,CoIP, ChIP, RIP, MeRIP-qPCR等（云序生物提供此服务）
原文链接：m6A mRNA methylation regulates testosterone synthesis through modulating autophagy in Leydig cells
文章内容
1.自噬对LCs中睾酮的合成至关重要
本研究中作者检测了LCs自噬标记物LC3B-II，发现LCs中LC3B-II在细胞分化过程中表达增加，并且在成年人LCs中达到峰值。此外LC3B-II在LCs从茎细胞向成体细胞分化过程中表达量增加，同时血清睾酮水平逐渐升高。进一步研究发现沉默ATG7后抑制HsCG诱导LC3B-II表达和睾酮分泌，表明LCs自噬介导睾酮合成。
图1. LCs自噬介导睾酮合成
2.LCs的自噬依赖于AMPK信号通路
为了探究LCs自噬过程参与的信号通路，根据前期研究发现磷酸化AMPK亚基PRKAA2
Thr172是自噬过程中典型的启动者，并且可以增加其下游蛋白p-ULK1
Ser555的表达，本次实验中发现在LCs从茎细胞向成体细胞分化的过程中，细胞中p-RKAA2 Thr172和p-ULK1
Ser555水平稳定升高，而且AMPK抑制剂有效抑制HsCG诱导LC3B-II增加，并减少PRKAA2 Thr172和ULK1
Ser555的磷酸化，这些结果证实了LCs自噬诱导依赖于AMPK信号通路。
图2. LCs的自噬依赖于AMPK信号通路
3.CAMKK2/PPM1A参与PRKAA2 Thr172磷酸化过程
为了探究在LCs中HsCG诱导p-PRKAA2 Thr172
增强表达的机制，作者检测了两种经典的磷酸化激酶CAMKK2和STK11/LKB1以及去磷酸化酶PPM1A，数据显示HsCG可以诱导的CAMKK2表达增加和PPM1A的表达减少，此外，TM3细胞和初级LCs在CAMKK2敲低或者过表达PPM1A后，明显抑制了HsCG诱导增加LC3B-II的表达、AMPK活化和降低SQSTM1的表达。
图3. CAMKK2/PPM1A参与PRKAA2 Thr172磷酸化过程
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