ELISA法检测白细胞介素-10
IL-10主要由Th2细胞产生，但Tho细胞、Th，细胞、CD8+T细胞、活化的B细胞、单核-巨噬细胞、kupffer细胞、肝细胞、角化细胞等也可产生。IL-10参与抑制细胞合成炎性因子、集落刺激因子(CSF)等主要负反馈调节机制，能广谱抑制单核-巨噬细胞炎性介质ILl、IL-6、IL-8、TFN-γ的合成及表达；在免疫反应，可抑制Th：细胞产生细胞因子IL-2、IL-3、TFNγ等，其机制可能是通过与受体结合改变细胞内信号的传导途径而选择性抑制有关细胞因子mRNA的合成，IL-10能抑制Th，细胞的增殖及分泌IL-2、TFN-γ等细胞因子，抑制Th：细胞介导的免疫反应。正常肝内存在的IL-10就可以通过上述机制或直接拮抗TNF等细胞因子的作用而抑制机体的抗病毒免疫，故有抗肝组织炎性损伤的作用。
[检测方法] ELISA法
[方法学原理]
在微孔反应板上包被抗人ILlo单克隆抗体，待测标本和标准品中的IL-10会与抗人IL-10单克隆抗体结合，游离的成分被洗去，同时加人生物素化的抗人IL10抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。生物素与亲和素特异结合，抗人IL-10抗体与结合在单克隆抗体上的人IL-10结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色剂，若反应孔中有IL-10，HRP会使五色的显色剂呈现蓝色，加终止液变黄色。在波长450nm处测吸光度，IL-10浓度与吸光度成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中
的IL-10浓度。
[标本准备] 静脉血2ml，不抗凝。
[试剂]
1．预包被微孔反应板
2．浓缩酶结合物
3．酶结合物稀释液
4．标准晶和标本稀释液
5．浓缩生物素化抗体
6．ILl0标准品
7．浓缩洗涤液
8．显色剂A、B
9．终止液
[仪器] 酶标仪或全自动酶联免疫检测仪。
(检测步骤)
1．在微孔反应板相应孔中分别加入待测样本、不同浓度标准品100ul，再加生物素化抗体工作液50rd。
2．振荡混匀，置20～25℃环境中温育120min。
3．将孔内液体吸干，用洗涤液充分洗涤5次，干燥。
4．除空白孔外，加入酶结合物工作液100ul。
5．振荡混匀，置20-25C环境中温育30min。
6．将孔内液体吸干，用洗涤液充分洗涤5次，干燥。
7．每孔加入显色剂A、B各50u1，轻轻振荡混匀，37℃环境中避光显色10min。
8．加入终止液50ul后，轻轻振荡混匀。用酶标仪(450nm波长)测定各孔吸光度，与标准曲线对照，求出IL-10水平。
[正常参考值] 各实验室可根据检测方法的不同确立正常参考值。
[注意事项]
1.试剂盒从冷藏环境中取出时应在室温环境中平衡30min后方可使用，未用完的微孔条用自封袋密封保存。
2．酶标板洗涤时各孔均需加满洗涤液，防止孔内有游离酶不能洗净。应设定30-60s的洗涤浸泡时间。
3．滴加试剂前应将滴瓶翻转数次，使液体混匀。滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。
4．所有样品和废弃物都应按传染源处理。终止液为2mol／L硫酸，使用时应注意安全。
5．每批样本应同时做标准曲线。
6．检测剂工作液按说明书临用前配置。
7．若标本吸光度在标准曲线测定范围以外，应适当稀释后重测。
[临床意义] 在多发性硬化急性期IL-10水平处于低值，而缓解期水平则上升；SLE患者急性期IL-10 mRNA表达量明显增高，缓解期水平则降低；类风湿关节炎及骨关节炎患者急性期IL-10水平显著升高，缓解期水平则降低。
