正常角膜缘干细胞的免疫染色
正常角膜缘干细胞的免疫染色
试剂和材料：
1.一抗：
（1）ABCG2-----------------小鼠单克隆BXP-21---------1：100
（2）连接蛋白-43-----------兔多克隆CX43-------------1：100
（3）细胞角蛋白3（K3）-----小鼠单克隆AE5----------- 1：500
（4）细胞角蛋白12（K12）---兔多克隆J7-------------- 1：200
2.二抗；
（1）抗小鼠IgG-------------Alexa-488----------------1:2500
（2）抗兔IgG---------------Alexa-546----------------1:1500
3.封闭抗体：A配制的10%热灭活羊血清；
4.Trion X-100；
5.A；
6.多聚甲醛（PFA），将16%原液用A现配成4%的工作浓度；
7.Immu-Mount防褪色封片剂；
8.载玻片和#1盖玻片；
9.共聚焦显微镜；
实验方法：
1.培养在塑料平皿或羊膜上的细胞；
2.CMF-Saline G洗一遍；
3.用新鲜配制的4% PFA室温固定15min；
4.A洗一遍；
5.0.1% Triton X-100破膜10min；
6.样本与一抗室温孵育1h；
7.A洗2遍；
8.加入二抗室温孵育1h；
9.用A洗2遍；
10.#1盖玻片，用最小体积的防褪色的封片剂封片；
11.在荧光或共聚焦显微镜下用40&time油镜对样本进行观察。
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项目成果
