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乳过氧化物酶的检测

2022.5.07

鉴于其重要的应用价值,因此测定LP 活性尤为重要。目前,国内外有关LP 检测方法的研究较多,大多是基于颜色反应,利用酶促反应原理,借助分光光度计测定酶活大小。

苯胺类检测LP 活性

以苯胺类为底物测定过氧化物酶活性,其原理为在过氧化物酶存在时,H2O2 可使苯胺发生氧化聚合反应,产物为棕褐色物质。该物质于415 nm 波长下有最大光吸收,因此利用分光光度法测定反应液的吸光度,以吸光度的变化速率来表征过氧化物酶活力。

愈创木酚法检测乳过氧化物酶

愈创木酚检测方法的原理,在LP 催化作用下,过氧化氢氧化愈创木酚,产物为醌类化合物,此化合物可进一步缩合或与其他分子缩合,生成红棕色的4 -邻甲氧基苯酚。利用愈创木酚检测方法测定LP 时要求严格控制时间,检测过程中用酸终止酶促反应,导致试验结果明显偏低。

ABTS 法检测乳过氧化物酶

ABTS 主要用来测量和表征抗氧化剂抗氧化能力,是近些年兴起的一种相对简便的用于体外测定物质总抗氧化能力的方法。最初由Marklund 提出,用含有蛋白质的血红素过氧化物酶与ABTS 反应生成ABTS+,用于测定样品中血红蛋白的含量,目前已广泛应用于包括血清类的生物样品、果蔬类和一些纯物质抗氧化能力的测定。利用ABTS 法检测LP的原理如下:在LP的催化作用下,过氧化氢可将无色的还原型ABTS 氧化,生成的氧化型ABTS 为绿色物质,该绿色物质于416 nm 波长附近有最大光吸收。根据颜色的深浅,借助于可见分光光度计,测定反应的吸光度,进而换算待测样的酶活或酶浓度。

TMB 法检测乳过氧化物酶

TMB 因其安全性和较高的敏感性,正逐步取代有致癌性的ABTS 显色剂用于LP 的检测中。TMB检测法的原理是在过氧化物酶存在条件下,TMB 能被过氧化氢氧化生成明亮的蓝色物质,已知该有色物质于波长655 nm 下有最大吸收峰。根据颜色的深浅,借助分光光度计,测定反应的吸光度,进而换算待测样的酶活或酶浓度。

免疫学方法

酶联免疫吸附试验(ELISA) 即将抗原或抗体吸附在固相载体表面,使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。ELISA 方法是近30 年来发展起来的综合性酶免疫化学分析方法,采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接,然后通过酶与底物产生颜色反应,用于定量测定抗原或者抗体。使用该测定方法有3 种必要的试剂:固相的抗原或抗体(免疫吸附剂)、酶标记的抗原或抗体(标记物)、酶作用的底物(显色剂)。

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