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分析测试百科网 > 行业资讯 > 技术原理

酿酒酵母的LiAc/ssDNA/PEG高效转化法实验_快速简便的转化法

2019.4.04
实验材料

酵母菌

试剂、试剂盒

LiAc

仪器、耗材

YPAD 平板YPAD 液体培养基

实验步骤

1. 将 10 μl 接种物在 YPAD 平板上涂布 2.0 cm2，培养过夜。

2. 对一个转化来说，在微量离心管中用 1.0 ml 灭菌水悬浮一接种环酵母菌。

3. 离心沉淀细胞，将水去掉。

4. 用 500 μl 100 mmol/L 的 LiAc 重悬细胞，30℃ 水浴 15 分钟。

5. 制备转化混合物：每个转化管加 240 μl PEG、36 μl 1.0 mol/L 的 LiAc、25 μl ssDNA、5.0 μl 质粒 DNA 和 45 μl 水。

6. 用微量离心机离心沉淀细胞，去掉 LiAc。

7. 向每个细胞沉淀中加入 350 μl 转化混合物，剧烈涡旋混匀。

8. 30℃ 水浴 30 分钟。

9. 42℃ 水浴热休克 20 分钟。

10. 用微量离心机最高速度离心 15 秒，去掉转化混合物。

11. 吸取 1.0 ml 灭菌水加到管中，上下吹打并剧烈涡旋以重悬细胞。

12. 吸取 100 μl 样品涂布 SC 减样选择培养基平板，30℃ 培养 2~4 天。

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