酿酒酵母的LiAc/ssDNA/PEG高效转化法实验
实验材料 DNA
试剂、试剂盒 TE 缓冲液双蒸水
仪器、耗材 磁力搅拌器玻璃烧杯
实验步骤
一、单链载体 DNA 的制备
1. 在 100 ml 灭菌 TE 缓冲液中溶解 200 mg 高分子量 DNA，置于磁力搅拌器上剧烈搅拌 2~3 个小时以混匀。
2. 将载体 DNA 溶液分装成 9 个 10 ml 和 10 个 1 ml 的等份，储存于 -20℃。
3. 在使用前，将 1 ml 的载体 DNA 煮沸 10 分钟，并于冰水浴中迅速冷却。
二、醋酸锂的制备
1. 在 90 ml 双蒸水中溶解 10.2 g LiAc。
2. 调节终体积到 100 ml，过滤除菌。
三、PEG 的制备
1. 将 50 g 分子量为 3350 的 PEG 放入 150 ml 的玻璃烧杯中，加入 35 ml 双蒸去离子水。
2. 用磁力搅拌器搅拌至溶解，大约需要 30 分钟。
3. 将液体转移到 100 ml 的量筒中。
4. 用少量双蒸水洗一下烧杯并加到盛 PEG 的量筒中，使体积恰恰达到 100 ml，通过颠倒充分混匀。
5. 用 0.45 μm 的滤膜过滤除菌，储存于带密封盖的瓶子中。
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