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电穿孔技术实验室实践

2022.2.07

电穿孔是用电穿孔器,在细胞溶液中产生静电场的专用器具进行的。将细胞悬浮液被吸取到一具有两个铝玻璃或塑料比色皿电极在其两侧。对于细菌电穿孔,通常使用约50微升的悬浮液。在电穿孔之前,将这种细菌悬液与质粒混合被改变。将混合物移液到比色杯中,设定电压和电容,并将比色杯插入电穿孔仪中。该过程需要电极和悬架之间的直接接触。在电穿孔后立即将1毫升液体培养基加入到细菌中(在比色杯中或在Eppendorf管中),并将细菌在细菌的最佳温度下孵育1小时或更长时间以使细胞恢复并表达质粒,随后在琼脂平板上细菌培养。

电穿孔的成功很大程度上取决于质粒溶液的纯度,特别是其盐含量。高盐浓度的溶液可能会导致放电(称为电弧放电),这往往会降低细菌的活力。对于该方法的进一步的详细调查,更应注意的输出阻抗的穿孔器装置和所述输入阻抗的细胞悬浮液(例如盐含量)。

由于细胞膜不能通过电流(离子通道除外),所以它起电容器的作用。对膜进行高压电场导致其暂时分解,导致孔大到足以使大分子(如DNA)进入或离开电池   。


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