RT-PCR一步法与两步法有什么不同
两步法RT-PCR比较 常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品时易于操作，有助于减少残余污 染，因为在cDNA合成和扩增之间不需要打开管盖。一步法可以得到更高的灵敏度，最低可以达到0.1pg总RNA，这是因为整个cDNA样品都被扩增。 对于成功的一步法RT-PCR， 一般使用反义的基因特异性引物起始cDNA合成。 一步法 两步法 起始第一链cDNA合成使用： 起始第一链合成使用 Oligo(dT) GSP引物 随机六聚体 GSP引物 优点 优点 灵活 方便 引物选择 扩增酶同逆转录酶预先混合 扩增酶的选择 转管步骤少，减少污染可能性 困难RT-PCR的优化能力 高灵敏度 同 Platinum酶结合提高特异性 适用于大量样品分析 同PlatinumPfxTaqDNA聚合酶结合提高忠实性 适用于定量PCR 适用于在单个样品中检测几个mRNA
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