逆转录RT-PCR实验仪器及条件
实验器具的准备：RT-PCR所用的500μl和200μl薄壁EP管、移液器吸嘴最好用进口的，因为进口EP管、移液器吸嘴已经去除了RNasin，也已经灭菌处理过，可以直接用。实验前用干净的镊子夹取出EP管、移液器吸嘴插好备用，注意镊子不要碰到EP管内壁和吸嘴的尖部。如果用国产500μl和200μlEP管和移液器吸嘴，则要提前配制0.05%——0.1%的DEPC水，将EP管、移液器吸嘴和吸嘴盒都浸泡在DEPC水中过夜后再用蒸馏水反复冲洗掉粘附的DEPC，再高压灭菌后60℃烤干备用。注意DEPC有毒，在配制及使用时应在通风橱进行，应全程带手套、口罩。
试剂的准备：做RT-PCR的试剂应提前确定储备量，如试剂量不能满足一次完整的RT-PCR操作，应马上订购试剂，等试剂到了以后再做。因为RNA易降解，提取之后就应立即反转录，或在-80℃冰箱中保存，但是反复冻溶也容易使RNA降解，所以一旦RNA提取或溶解就应立即进行反转录。RT-PCR的试剂都应在冰上溶解。
仪器：高速冷冻离心机、PCR仪、核酸检测仪、凝胶成相系统都应提前检查是否处于正常状态。特别是PCR仪对环境温度有要求时，应提前保证环境温度。
RNA浓度测定：RNA提取后必须测浓度，记录A260吸光度及A260/A280的值，计算RNA浓度及纯度。
反应体系的计算：做反转录时，根据RNA浓度计算出RNA样品的量和DEPC水的量。做PCR时，反应体系根据cDNA的样品数计算每种试剂的量，可以多计算一个（吸嘴和管壁上会粘），混后均分。反应体系的计算是非常重要的，如果出错，不但浪费试剂和样品，结果有错误，也耽误时间。
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