HBV DNA与HBV
【摘要】目的： 探讨荧光定量PCR检测HBV DNA与HBVm的关系。 方法： 采用荧光定量PCR法和酶联免疫吸附试验（ELISA）对159份HBVm 8种不同阳性模式及67份HBVm全阴模式血清进行HBV DNA检测。 结果： HBsAg、HBcAb、HBeAe阳性者HBV DNA阳性率为8983%； HBsAg、HBcAb、HBeAb阳性者HBV DNA阳性率为2881%； HBsAb、HBcAb、HBeAb阳性者HBV DNA阳性率为1666%； HBVm全阴性者HBV DNA阳性率为1791%。 结论： 荧光定量PCR法检测HBV DNA是乙型肝炎病毒复制最直接可信的指标，可反映HBV真实感染和复制状态，特别是低复制状态，明显优于ELISA法检测HBVm，具有重要临床意义。
【关键词】乙型肝炎病毒; 脱氧核糖核酸; 荧光定量聚合酶链反应; 血清标志物; 酶联免疫吸附试验
Comparative Analysis between HBV DNA by FQPCR and HBVm by ELISA
LIU Jinlu, LI Caiqing, LU Cheng, et al
The First Affiliated Hospital， Hebei North University, Zhangjiakou, 075000, Hebei China
【ABSTRACT】Objective: To investigate the relationship between HBVDNA determined by the polymerase chain reaction (PCR) assay and HepatitisB markers by ELISA method.Methods: The serum samples from 159 cases with 8 different positive models and 67 cases with all negative models were tested by Fluorescence quantitative PCR assay (FQPCR) and also by ELISA to compare the results.Results: Among the patients,the positive rate of HBVDNA for the patients with positive HBsAg、HBcAB and HBeAe was 8983%;the positive rate of HBVDNA for the patients with positive HBsAg、HBcAb and HBsAb was 2881%;the positive rate of HBVDNA for the patients with positive HBsAb、HBcAb and HBeAb was 1666%;the positive rate of HBV DNA for the patients with all negative HBVm was 1791%.Conclusione: HBVDNA determined by PCR assay is much more corrct and sensitive than HBVmarkers by ELISA assay.FQPCR could be used as a excellent monitor for the state of HBV irfection and its complication, especially for the state of low complication.
【KEY WORDS】HBV; DNA; FQPCR; HBVm; ELISA
HBV DNA 荧光定量检测是目前诊断乙型肝炎、判断病毒复制和评价患者肝脏病变、预后及药物疗效的重要指标之一，目前国内外已普遍应用于临床。为进一步了解HBV DNA 检测的实用价值及临床意义，我们对226份血清标本，同时用ELISA 检测HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb、及应用HBV DNA 荧光定量技术检测HBV DNA，对检测结果及临床应用作出评价。
1材料和方法
11标本来源226份血清标本来自200412～20053月到感染科作乙型肝炎血清标志检测者标本。所有标本均为随机抽样而未作任何选择，在做乙型肝炎血清标志检测同时，进行HBV DNA荧光定量检测。
１2试剂与方法
１２１乙型肝炎血清标志检测试剂均采用厦门新创科技有限公司提供的ELISA 药盒，按说明书操作。
１２２HBV DNA 荧光定量检测：药盒由广东中山迅达公司提供，按说明书操作。
２结果
226份血清标本的HBV DNA 及乙型肝炎血清标志物检测结果如表1。2006年2月刘金禄等：HBV DNA与HBVm对比分析第1期2006年2月河北北方学院学报（医学版）第1期表1226例乙型肝炎血清标志物及DNA检测结果
ＨＢＶ血清标志物HBsAgHBsAbHBcAbHbeAgHbeAbHBV DNA总数阳性数阳性%copy/ml+-++-59538983*103-8+-+-+56172881*103-6+--+-215000103-6+-+--21115238103-6-++--734285103-5-+---623333103-++-+611666104-----67121791*103-4+----215000103合计〖6〗226482123注： *三组χ2检验：χ2=689,112＞χ2005（2）=599 ，P＜005。
３讨论
HBV DNA与HBeAg密切相关， HBV DNA和HBeAg都是评价乙肝患者传染性的重要指标。本文的检测结果，8983% 的HBeAg阳性血清中检出HBV DNA，符合以上观点。略低于雷学忠、张春兰的报道925%、9375%［1,2］。
从上述检测结果可见，如果单凭HBeAg阳性或单凭 HBV DNA 阳性来判断乙型肝炎患者的传染性，将会漏掉10％左右具有传染性乙型肝炎患者。因此我们认为应把HBeAg和 HBV DNA 结合起来，两者只要有一项阳性就应考虑其具有传染性。只有这样才能把乙肝的预防、隔离及治疗工作做彻底。
近来有文献指出［3］：在部份HBsAg及HBeAb 阳性的乙肝患者血清中HBV DNA也阳性。因此认为，抗HBe阳性只能说明病毒复制程度减低，而不能代表复制停止，病情有可能反复。我们在56例小三阳的血清中有17例HBV DNA 阳性，阳性率2881％也反映以上观点。与邱隆敏报道316%和雷学忠报道3235%近似［4］。所以我们认为在判断乙型肝炎的预后，HBV DNA比HBeAg更敏感而特异。当乙肝病毒血清标志物检测结果为HBeAg阴转，而HBeAb阳转还不能乐观，只有在HBeAg与HBV DNA 同时阴转时，病情才可能是较隐定的康复期。因此把HBV DNA列入常规检查，将更能准确、更全面地判断急慢性乙型肝炎的预后。
邱隆敏报道［4］HBsAb、HBcAb、HBeAb阳性者HBV DNA阳性率为20%，我们HBsAb、HBcAb、HBeAb阳性者HBV DNA阳性率为1666%。
从表1还可见：在67例全部阴性的血清中查出12例HBV DNA 阳性，阳性率1791％。明显高于雷学忠667%报道［1］。ELISA检测肝炎病毒是目前最常用方法之一，但影响因素颇多，如加样时间，试剂平衡时间，样本溶血程度等等。特别是低浓度样本易导致假阴性结果，使弱阳性样本漏检。这对于筛选献血者具有很大价值。因而我们认为在筛选献血员时，最好能同时检HBV DNA。
从表1中HBV DNA拷贝数量上看，大三阳明显高于其它模式组，这对于乙肝药物选择及疗效观察具有极重要的意义。
综上所述，乙型肝炎患者HBV荧光定量检测是病毒复制最直接可信的指标，动态荧光定量PCR检测HBV DNA对监测乙型肝炎感染的病情发展及抗HBV复制药物的疗效具有极重要的意义。对于HBVm全阴者， HBV DNA处于低拷贝意义有待进一步研究、探讨。
参考文献
1雷学忠，赵建勤，刘 丽，等.荧光定量检测PCR HBV DNA与乙肝两对半结果对比分析研究[J].四川医学，2000，21（11）:949950
2张春兰，谢敏，蔡晓莉，等.定量聚合酶链反应检测肝病患者血清HBV DNA及治疗意义[J].临床肝胆病杂志，1999，15（3）:166169
3Chao HLY，Hussain M，LoK ASF.Different hepatitis B Virus genotypes are associated with different mutation in the cove promoter and precore regions during hepatitis B antigen seroconversion[J].Hepatology，1999，29:976984
4邱龙敏，罗亚文，吴亚丽，等.乙肝病毒DNA与血清免疫标志物的对比研究[J].遵义医学院学报，1998，21（3）:1920
