两性霉素B的检查及鉴别方法
鉴别
(1)在含量测定项下记录的色谱图中,供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。(2)本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱(光谱集176图)一致。
检查
酸度取本品3%的混悬液,依法测定(通则0631),pH值应为4.0~6.0有关物质照高效液相色谱法(通则0512)测定。临用新制。溶剂N,N-二甲基甲酰胺-水(1:1)供试品溶液取本品适量,精密称定,置棕色量瓶中,加N-二甲基甲酰胺溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.8mg的溶液,精密量取适量,用溶剂定量稀释制成每1ml中约含80g的溶液。对照品溶液取两性霉素B对照品适量,精密称定,置棕色量瓶中,加N,N-二甲基甲酰胺溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.8mg的溶液,精密量取适量,用溶剂定量稀释制成每1ml中约含0.84g的溶液。系统适用性溶液取两性霉素B约8mg,置50ml棕色量瓶中,加N,N-二甲基甲酰胺5ml使溶解,用甲醇稀释至刻度,加盐酸0.1ml,摇匀,放置1小时,取5ml,置10ml量瓶中用水稀释至刻度,摇匀。灵敏度溶液精密量取对照品溶液适量,用溶剂定量稀释制成每1ml中约含0.08g的溶液色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6mm×250mm,5μm或效能相当的色谱柱);以乙腈磷酸溶液(pH1.00±0.05)(300:700)为流动相A,以乙腈-磷酸溶液(pF1.00±0.05)(500:500)为流动相B,按下表进行线性梯度洗脱;流速为每分钟0.8ml;柱温为25℃;检测波长为303nm和383nm;进样体积1001l时间(分钟)流动相A(%流动相B(%)060系统适用性要求系统适用性溶液色谱图(383nm)中,必要时调整流动相的比例使两性霉素B的保留时间在25~30分钟之间,杂质C峰与杂质B峰间的分离度应符合要求灵敏度溶液色谱图(383nm)中,主成分色谱峰高的信噪比应大于10。测定法精密量取供试品溶液与对照品溶液,分别注人液相色谱仪,记录色谱图限度供试品溶液色谱图(303nm)中如有杂质峰,杂质A(相对保留时间约为0.75)峰面积不得大于两性霉素B峰面积的0.5倍(2.0%)(供注射用),杂质A峰面积不得大于两性霉素B峰面积的1.25倍(5.0%)(供非注射用),其他单个杂质峰面积不得大于两性霉素B峰面积的0.25倍(1.0%),小于两性霉素B峰面积的0.025倍的峰忽略不计(0.1%);供试品溶液色谱图(383nm)中如有杂质峰,按外标法以对照品溶液主峰面积计算,杂质B与杂质D之和不得过4.0%,其他单个杂质峰不得过2.0%,小于灵敏度溶液主峰面积的峰忽略不计。303nm处与383nm处检测的杂质总量不得过15.0%。干燥失重取本品,以五氧化二磷为干燥剂,在60℃减压干燥至恒重,减失重量不得过5.0%(通则0831)。
