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抗坏血酸含量的测定

2019.4.10

抗坏血酸含量的测定可以用于：（1）检测植物中抗坏血酸的含量；（2）检测食品、药品中抗坏血酸的含量。

实验方法原理	还原型抗坏血酸（AsA）可以把铁离子还原成亚铁离子，亚铁离子与红菲咯啉（4,7-二苯基-1,10-菲咯啉，BP）反应形成红色螯合物。在534nm 波长的吸收值与AsA含量正相关，故可用比色法测定。脱氧抗坏血酸（DAsA）可由二硫苏糖醇（DTT）还原成AsA。测定AsA总量，从中减去还原型 AsA，即为DAsA含量。
实验材料	植物材料
试剂、试剂盒	三氯乙酸 TCA 无水乙醇溶液磷酸－乙醇溶液 BP－乙醇溶液 FeCl3－乙醇溶液 DTT Na2HPO4－NaOH溶液 DTT－乙醇
仪器、耗材	分光光度计离心机研钵试管
实验步骤	1. 制作标准曲线配制浓度为2mg/L，4mg/L，6mg/L，8mg/L，10mg/L，12mg/L，14mg/L的AsA系列标准液。取各浓度标准液1.0ml于试管中，加入1.0ml 5%TCA、1.0ml乙醇摇匀，再依次加入0.5ml 0.4%H3PO4－乙醇、1.0ml 0.5%BP－乙醇、0.5ml 0.03%FeCl3－乙醇，总体积5.0ml。将溶液置于30℃下反应90min，然后测定A534。以AsA浓度为横坐标，以A534为纵坐标绘制标准曲线，求出线性方程。 2. 提取取植物叶片1.0g，按1∶5（W/V）加入5%TCA研磨，4000r/min离心10min，上清液供测定。 3. 测定（1）AsA测定取1.0ml样品提取液于试管中，按上述相同的方法进行测定，并根据标准曲线计算AsA含量。（2）DAsA测定向1.0ml样品液中加入0.5ml 60mmol/L DTT－乙醇溶液，用Na2HPO4－NaOH混合液，将溶液PH调至7~8，置于室温下10min，使DAsA还原。然后加入0.5ml 20%TCA，把PH调至1~2。按AsA相同方法进行测定，计算出总AsA含量，从中减去AsA，即得DAsA含量。展开
注意事项	反应应具有较高的选择性，即选用的显色剂最好只与待测组分反应，而不与其他干扰组分反应或其他组分的干扰很小。