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第三届全国生物质谱学术交流会隆重召开

2010.5.15

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Prof. Hookeun Lee, Gachon University of Medicine and Science, Korea

Title: Mass Spectrometric Quantitative Proteomic Analysis: Roles of Microcapillary Liquid Chromatography

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  复旦大学 张祥民教授

  来自复旦大学的张祥民教授为大家带来了题为《蛋白质水平的色谱分离与生物质谱鉴定新方法研究》的报告。

  张教授所在课题组通过对液相色谱分离系统的优化,在实际蛋白质样品考察优化了系统的分离性能,构建了液相色谱分离蛋白质鉴定方法与平台。研制了蛋白水平富集预柱,并将其应用于蛋白质捕集。在离子交换色谱柱和反向色谱优化选择上,实现了蛋白质分析所需的高分辨分离。色谱分离组分点样至靶板上,利用发展的快速酶解技术完成蛋白质酶解,再通过MALDI-TOFTOFMS或LC-LTQMS进行蛋白质鉴定。该方法使得蛋白质的理论分离能力达到5000个以上,蛋白质组分能够得到浓度信息,质谱鉴定可以同时利用肽指纹图谱PMFs信息和串级序列信息,使得蛋白质鉴定的可靠性大为提高。

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  中国科学院大连化学物理研究所 张丽华研究员

  中国科学院大连化学物理研究所的张丽华研究员为大家介绍了有关《基于离子液体的新型膜蛋白质组预处理及分离鉴定技术》的报告。

  张老师首先指出由于膜蛋白质,尤其是具有多个跨膜区的跨膜蛋白质,具有疏水性强、溶解性差、易沉淀、难酶解、含量低等特点,因此在采用通常用于可溶性蛋白质组分离鉴定的方法对膜蛋白质组进行研究时遇到了很大的挑战。

  张老师所在可以租发展了一种基于离子液体的膜蛋白质样品处理方法,该方法具备对膜蛋白溶解能力强、与酶的生物相容性好、热稳定性高以及质谱鉴定前容易去初等优势。通过对鼠脑膜蛋白和人肝微粒体组分蛋白质表达谱的分析结果表明,离子液体不仅可以提高膜蛋白的溶解性,而且不用影响后续酶解过程中酶的活性。此外,在样品进入质谱鉴定前,易于在除盐步骤去除,不会影响质谱鉴定。与其他膜蛋白质组研究中常用的增溶剂相比,离子液体在膜蛋白质组样品预处理中表现出明显的优势。

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  军事医学科学院放射与辐射医学研究所 张养军副研究员

  来自军事医学科学院放射与辐射医学研究所的张养军副研究员为大家介绍了关于《多层键合磷酸锆开管毛细管柱的制备及及其在磷酸肽富集分析中的应用》的报告。

  张老师在报告中主要介绍了一种利用键合磷酸锆开管毛细管柱的制备及用于快速富集磷酸肽的新方法。对该多层开关毛细管柱的富集条件的优化结果表明,当开管柱长度为50 cm时,标准磷酸肽的进样流速在0.3μL/min -0.5μL/min时,均有很好的富集效果。并且在同样的流速条件下,使用不同内径的多层开管柱进行富集时,富集效果没有显著性差异。该富集方法对磷酸肽有较高的选择性,且检测限达到10-9M。

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