TRIzol法同时提取RNA、DNA、蛋白质-4
注意事项：
1. DNA在中间层和有机相中时可在2～8℃保存过夜。
2.DNA沉淀在75%乙醇中2～8℃可保存几个月。
3.DNA在8mM NaOH溶液中4℃可放置过夜，如长期保存需用HEPES调节pH至7～8并且加EDTA至1mM，可置于4℃或-20℃长期保存。
常见问题分析：
得率低：
A.样品匀浆和裂解的不彻底。
B.最终得到的DNA沉淀没有完全溶解。
A260/A280<1.70 ：
A. 检测吸光度时，RNA样品没有溶于水，而溶于了TE中。
B.酚除去的不彻底，可用0.1M柠檬酸钠（含10%乙醇）再洗一遍DNA沉淀。
DNA降解：
A.组织取出后没有马上处理或冷冻。
B.待提取RNA的样品没有保存于-60至-70℃，而保存在了-5至-20℃。
C.样品匀浆时使用了高速匀浆仪。
RNA污染：
A.氯仿分层后水相去除的不干净。
B.DNA沉淀用0.1M柠檬酸钠（含10%乙醇）洗的不彻底。
蛋白质的提取
准备试剂：异丙醇含0.3M盐酸胍的95%乙醇无水乙醇1%SDS。
操作步骤：
1.取沉淀DNA后剩余的上清，用异丙醇沉淀蛋白质。每使用1ml TRIzol加1.5ml异丙醇，室温放置10分钟，2～8℃12000×g离心10分钟弃上清。
2.用含0.3M盐酸胍的95%乙醇洗涤蛋白质沉淀。每使用1mlTRIzol加2ml洗涤液，室温放置20分钟，2～8℃7500×g离心5分钟，弃上清，重复两次。用2ml无水乙醇同样方法再洗一次。
3.真空抽干蛋白质沉淀5～10分钟，用1%SDS溶解蛋白质，反复吸打，50℃温浴使其完全溶解，不溶物2～8℃10000×g离心10分钟除去。分离得到的蛋白质样品可用于Western Blot或-5至-20℃保存备用。
注意事项：
1.蛋白质沉淀可保存在含0.3M盐酸胍的95%乙醇或无水乙醇中2～8℃一个月以上或-5至-20℃一年以上。
2.用0.1% SDS在2～8℃透析三次，10000×g离心10分钟取上清即可用于Western Blot。
常见问题分析：
得率低：
A.样品裂解或匀浆处理不彻底。
B.最后得到的蛋白质沉淀未完全溶解。
蛋白质降解：组织取出后没有马上处理或冷冻。
电泳时条带变形：蛋白质沉淀洗涤不充分。
