利用 TSQ Quantiva 定量肉类掺假比例（二）
实验结果
1.种属特征性多肽的确认
种属特征性多肽寻找验证是肉类掺假实验的关键点，因此我们通过高分辨的 Q Exactive 质谱平台，研究了常见的五种肉类。选出每个物种专属性的多肽，去掉含有酶漏切位点的多肽，鉴定到各个物种相对于其他四种物种专属性的多肽条数为：鸡 339 条，鸭 125 条，猪 426 条，牛 337 条，羊 152 条。其中，鸡和鸭都为鸟纲家禽类，羊、牛、猪为哺乳纲真兽亚纲动物，前两者之间的进化亲缘关系更近，我们同时找到了鸡和鸭相对其他三种兽类专属性的多肽 336 条。Pep003 为来源于鸡/鸭的特征性肽段，图 2 为利用 TSQ Quantiva 在不同掺假比例的样本中定量 Pep003 的 XIC（eXtracted Ion Chromatogram）图：
图 2. TSQ Quantiva 在不同掺假比例的样本中定量 Pep003 的 XIC 图
2.定量离子对的选择
依据丰度信息，我们选取了六条鸡与鸭的特征性多肽（不含漏切位点，不含甲硫氨酸，不含 NXS/T 的糖基化基序），导入 Pinpoint 软件，利用 Pinpoint 软件自动导出离子对与碰撞能量信息，先采集一遍样品的信息，利用 Pinpoint 软件生成 schedule 信息，导入仪器自动生成最后的采集方法。方法中的离子对信息见下表：
表 2. 定量离子对和 Schedule 信息
3.定量结果与定量下限
通过将鸡肉与鸭肉按不同比例掺加到 1 μg 的羊肉中，利用 SRM 的方法，定量研究能够检测到的最低掺比比例，并利用 Xcalibur 定量模块对上面的多肽分别进行定量，确定线性范围。其中 Pep001 和 Pep003 都能够定量到 5 ng 的最低掺假，剩下的四条能够定量到 10 ng 掺假。即分别能够检测到 0.5% 比例的掺假和 1% 比例掺假，实际标准曲线与线性范围如下：
图 3. 定量标准曲线与线性范围
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