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FLIPRTETRA系统检测细胞内PH值变化的实验(二)

2020.6.02

细胞清洗

染料加载后并添加了NH4Cl溶液,需要用清洗缓冲液清洗几次以去除细胞外的染料。所有清洗步骤中均需含有20 mM NH4Cl。建议使用Molecular Devices公司的洗板机,适用于96孔或384孔板,可调节高度和速率。

从FLIPR系统得到的高质量数据一部分取决于细胞清洗环节的洗板机性能,是否可以保证最后一次清洗结束后每个孔中剩余的体积是一致的。手动清洗后得到的结果差异性更大。另外,如果手动清洗切记注意不要在两次清洗步骤之间吸干孔中溶液使得细胞直接暴露在空气中。

注: 清洗缓冲液和稀释化合物的缓冲液是不一样的。

运行实验

实验前一天将细胞种在 实验前一天将细胞种在 实验前一天将细胞种在 实验前一天将细胞种在 实验前一天将细胞种在 相应的黑壁 相应的黑壁 相应的黑壁 96 或 384孔细胞板上 :

1) 加入 BCECF,孵育 45 分钟

2) 加入 20mM NH 4Cl ,孵育 ,孵育 15 分钟

3) 用含 20mM NH4Cl 的缓冲液清洗细胞

4) 开始实验

2015526104236650.jpg

仪器设置

下表中FLIPR系统设置的参数适用于所有CHO细胞的BCECF实验。


 2015526104254490.jpg


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