关注公众号

关注公众号

手机扫码查看

手机查看

喜欢作者

打赏方式

微信支付微信支付
支付宝支付支付宝支付
×

酶蛋白的传统测定法

2022.5.10

  酶蛋白浓度测定的方法:酶浓度严格来说是指酶分子的质量浓度,常以酶蛋白浓度来表示。人体体液中的酶有几百种,除LPS、LCAT、ChE、铜氧化酶(CER)外,大多数酶的含量在μg/L水平甚至更低。因此,酶活性浓度的测定是主要测定方法。20世纪70年代以后,随着新技术特别是免疫学技术的发展,酶的定量分析技术中出现了许多利用酶蛋白的抗原性,通过抗原抗体反应直接测定酶蛋白质量的新方法。国内外曾使用电泳法、柱层析法、免疫化学法等测定酶浓度,其中以免疫化学法应用较广。免疫化学法是利用酶蛋白的抗原性,制备特异性抗体后用免疫学方法测定酶浓度。用于酶浓度测定的免疫化学方法有:免疫抑制法、免疫沉淀法、放射免疫测定(RIA)、化学发光免疫测定(CLIA)、酶免疫测定(EIA)、荧光酶免疫测定(FEIA)等。其中,前两种方法可用于酶活性浓度测定,其他方法则用于酶蛋白浓度测定。例如,如免疫抑制法测定CK-MB的活性、免疫沉淀法(单向扩散法)法测定超氧化物歧化酶(SOD)的活性;RIA测定胰蛋白酶和弹性蛋白酶浓度、CLIA测定CK-MB的浓度、ELISA测定神经元特异性烯醇化酶(NSE)浓度等。

  CK-MB是诊断AMI、测定心肌梗塞面积的重要指标。国外对AMI诊断效率评价时多采用测定CK-MB质量,即测定CK-MB的酶蛋白质量浓度(Mass)的方法。CK-MB质量的测定通常是制备抗CK-M抗体和抗CK-B抗体或采用CK-MB抗体,用CLIA、ELISA、FEIA等方法测定。这些方法适用于临床自动化分析,具有测定时间短(最快仅需7min)、灵敏性高(最低检测限<µg/L)和准确性好的特点,明显优于其他分析测定CK-MB的方法,1990年后逐渐被广泛接受。为使CK-MB质量分析标准化,AACC成立了专门的标准化委员会,已研制成功采用重组基因技术的CK-MB参考材料(Rck-2)。

  由于酶浓度测定方法的不同,报告方式也有差异:酶活性浓度单位常以U/L报告,酶质量(mass)浓度单位常直接用ng/ml或mg/L报告。临床医生应注意报告方式不同所带来的差异。

推荐
关闭