做pcr只有二聚体没有目的条带是什么原因
1.确认在样本中含有目标片段，cDNA这段序列和上下游引物的设计是匹配的，别弄反了
2.确认模板的质量。需要对模板进行OD260/280的检测，以确定模板的完整性和浓度是否符合要求。如果觉得不好弄，就多加点模板再试试。
3.引物本身的互补碱基有多少个？
4.梯度退火的范围是多少？通常Tm值要比引物公司给出的值低3-4度。我曾经最高尝试过70C开始的touchdown PCR，就是从70C开始退火，每2个循环退火温度降低1度，也可以增加扩增的特异性。
5.楼上提到的热启动DNA，有时候需要用热启动酶完成，就是前面需要有一个5-15min的95C处理，激活聚合酶，这种酶在常温下没有活性，不会在进行PCR反应体系配制的时候发生非特异结合。如果不想买热启动酶，还可以将PCR反应体系都加好，除了酶以外，放到PCR仪上进行加热，当溶液加热到90C以上，再打开机器，非别把酶加进去也行。最简便的办法是，在冰上把溶液全部配好，等到PCR仪的温度上升到65度以上，再把管子放进去，也算是热启动了。
其实，如果序列没有什么特别的，只有引物二聚体的话，通常要么是模板，要么是引物设计出问题了。因为体系中没有匹配的序列供引物去识别和结合，只能形成二聚体了。
推荐
