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免疫亲和柱荧光计快速测定法

2021.11.19

  (1)试剂与设备

  ①4-系列真菌毒素专用荧光计。

  ②均质器(250mL)。

  微量移液器(0.5mL)。

  涡流混合器。

  ⑤塑料注射器(60mL)。

  ⑥VICAM T-2毒素亲和柱。

  ⑦聚乙二醇(PEG),相对分子质量8000。

  色谱级甲醇。

  ⑨PBS缓冲液。

  ⑩氯化钠。

  ⑪VICAM T-2毒素衍生液。

  ⑫VICAM T-2毒素标定用溶液(红色)。

  ⑬0.02%吐温/PBS 缓冲液:0.1mL 吐温+9.99mL PBS 缓冲液+490mL 水。

  (2)样品的提取与过滤

  ①称取50g 样品、5g 氯化钠、10g PEG 置于均质杯中。

  加入150mL 25%的甲醇,高速均质1min。

  ③用折叠式滤纸过滤,用干净的烧杯收集25mL的滤液。

  ④用25mL 的水将滤液稀释1倍。

  ⑤将 T-2毒素亲和柱与60mL 塑料注射器筒相连。

  ⑥将40mL T-2毒素标定用溶液加入至塑料注射器筒中。

  (3)样品的制备与培养

  ①在塑料注射器筒中加入0.5mL 的T-2毒素衍生液。

  ②将塑料注射器筒从操作架上取下,用硅橡胶塞子塞好,翻转混合4~5次,然后再置于操作架上。

  (4)色谱柱分离操作与测定

  ①将空气泵与亲和柱相连,使注射器中的溶液以1~2滴/秒的速度通过亲和柱。

  ②用0.02%吐温/PBS 缓冲液以1~2滴秒的速度通过亲和柱。

  ③用2mL 色谱级的甲醇以1滴/秒的速度通过亲和柱,滤液收集于测试管中。

  ④将测试管置于荧光计中进行测定。

  ⑤检测限:0.15mg/kg,测定范围0~5.0mg/kg。


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