小鼠骨髓来源树突状细胞（BMDC）的培养（六）
【注意事项】
1. 小鼠品系和性别：
多数研究表明，所使用的小鼠品系与获得 BMDC 的数量和成熟度关系不大[9]，但也有研究表明C57BL/6小鼠可能更好。
Lutz表示从C57BL/10,DBA/2,C3 H/J和129等小鼠品系均可获得足够数量和纯 度的 BMDC,但 Lutz
在其实验中更倾向于使用 C57BL/6,ICR 和 BALB/c小鼠，且发现 C57BL/6
小鼠的BMDC产量最高，而且ICR小鼠和C57BL/6小鼠的BMDC对LPS 的成熟诱导敏感度高于BALB/c小鼠[8].
关于小鼠的性别，Inaba认为雄性小鼠更好些，因为他们的骨骼更大，从而可以获 得更多的前体细胞[10],但多数学者更倾向于使用雌性小鼠。
因此，目前培养BMDC用的比较多的小鼠是雌性或雄性C57BL/6小鼠。
2. 单独使用GM-CSF还是联合使用IL-4?
Inaba经典法和Lutz大量制备法中均仅用GM-CSF即可诱导出相当数量的 BMDC,而且也在混合淋巴细胞反应中表现出较强的刺激作用，但其实这些 BMDC的成熟度并不足够高。
研究显示，GM-CSF+IL-4联合诱导比GM-CSF单独诱导产生的BMDC表达更高的MHC
II类分子和共刺激分子CD80和CD86等，提示前者具有更强的抗原递呈能力，而且前者在混合淋巴细胞反应中表现出更有效的刺激能力[5,7].在动物实验中也发现，GM-CSF+IL-4
联合诱导的BMDC可产生保护性抗肿瘤免疫反应，而GM-CSF单独诱导的BMDC的保护性较弱 [6],这些都说明
GM-CSF+IL-4联合诱导的BMDC的成熟度高于GM-CSF单独诱导的BMDC.
德国明斯特大学（University
of Munster）的Labeur研究也表明，单独用GM-CSF诱导的BMDC为未成熟DC,GM-CSF和IL-4联合诱导产生的BMDC
的成熟度居中，添加CD40L或LPS可进一步诱导BMDC完全成熟 [7].
因此笔者认为，要想获得功能更好的BMDC,最好用GM-CSF和IL-4联合诱导骨髓细胞。而且，如果能在Inaba经典法和Lutz大量制备法中添加IL-4,应该会获得更加成熟、有效的BMDC.
3. 成熟诱导剂的选择
LPS，CD40L和TNF-α无论对人DC还是小鼠DC均是常用、有效的成熟诱导剂，那么应该选择哪个呢？
TNF-a 诱导DC的成熟能力在三者中最弱[7,8].LPS 和
CD40L均是DC体外完全成熟的强诱导剂，两者诱导DC的成熟度相似，但诱导产生的细胞因子谱有差异。CD40L诱导成熟的BMDC在体内显示出最强的免疫调节能力，包括保护性和治疗性肿瘤免疫反应的产生[7].
用LPS刺激DC完全成熟所用的浓度一般为 1-10μg/ml，但其实0.1 μg/ml已经有非 常强的作用，但保险起见，一般选用1 μg/ml。
对于CD40L需要注意的是，CD40L分子属于TNF配体家族，该家族的特点是在形 成三聚体后才能发挥作用。所以最好能用重组的CD40L三聚体蛋白来刺激DC,这样会有很好的效果。如果用CD40L单体来刺激DC,多数情况下成熟度并不是很高。
