小鼠骨髓来源树突状细胞（BMDC）的培养（二）
1. 这些工作均是在 Ralph M.Steinman的参与下完成的；
2. Inaba培养的BMDC来源于小鼠股骨和胫骨中的骨髓；
3. Inaba先用抗体+补体法去除骨髓中的淋巴细胞，以防淋巴细胞对BMDC培养的影响；
4. 在诱导分化过程中，为防止粒细胞的干扰，Inaba通过每2天轻摇培养板并3/4体积换液的方法来尽量去除粒细胞；
5. Inaba证实单用GM‐CSF通过6‐8天的培养，即可从骨髓细胞诱导得到 大量的 DC 细胞，而且混合淋巴细胞反应提示其为成熟的 DC 细胞；
6. 该法可从一个小鼠的骨髓中培养获得5‐7 x 106个DC细胞。
1994年---奥地利因斯布鲁克大学（University
of Innsbruck）的Romani等发现GM-CSF和IL-4（白细胞介素 4）联合诱导，可从人血液
PBMC（外周血单个核细胞）制备出大量的DC,而GM-CSF单独诱导的效果不好[4].后来，科学家也将IL-4应用于小鼠BMDC的培养[5,6].
1999年----德国明斯特大学（University
of Munster）的Labeur研究表明，单独用GM-CSF诱导的BMDC为未成熟DC（immature DC,
iDC），GM-CSF和IL-4联合诱导出来的BMDC的成熟度居中，添加CD40L或LPS可进一步诱导DC完全成熟，即成熟 DC（mature
DC, mDC）[7].
1999年---德国埃尔朗根大学（University of
Erlangen）的Lutz开发出一种可获得超大量BMDC的方法，每只小鼠可获得的BMDC的数量Inaba 经典方法的50倍之多，达1-3
x108个DC细胞/小鼠[8].该法被DC研究者广泛认可和使用。
1. 骨髓不作任何预先处理；
2. 使用细菌培养皿（Petri Dish）替代细胞培养板；
3. 细胞的初始铺板密度低，为 2 x 105/ml;
4. 培养时间延长至10‐12天；
5.仍仅用GM‐CSF诱导，但第8天或第10天后减量使用；
6.第6天和第8天半量换液，但吸出的悬浮细胞离心后放回原板。
2002年---美国匹兹堡癌症研究院大学（University of Pittsburgh Cancer
Institute（UPCI））的Son也研发出一种超大量BMDC培养方法，称为 bulk-culture
method.该法每只小鼠可获得的BMDC的数量是Inaba经典方法的7-10倍，即3 – 4 x
107个BMDC，而且培养时间与Inaba经典方法相似，仅需7天[9].
1. 骨髓取出后仅溶血，不做任何其它处理；
2. 使用6孔培养板培养；
3. 培养过程中使用GM‐CSF+IL‐4联合诱导；
4. 培养的第4天和第7天补加足量的GM‐CSF和IL‐4；
摘自文献 Son YI, et al. J Immunol Metods. 2002; 262（1-2）： 145-57 [9]
