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人源血清学检测二抗的选择标准(一)

2021.3.02

       血清学检测是许多健康问题诊断过程中的关键检测方法,包括器官移植筛查,交叉匹配,疾病诊断,监测等。这些检测在临床决策中起着至关重要的作用,免疫分析是目前可用的最强大,最灵敏的血清学检测方法之一,它基于抗原抗体之间的高度特异性结合,即使在低浓度下也能进行定性和定量检测。有多种免疫测定方法,以下是其中最常见两种检测方法示意图,分别是夹心法(图1A)和直接法(图1B),当选择用于夹心法检测的抗人二抗时(图1A),需要考虑一抗的种属,并使用与该物种有最小交叉反应的二抗。
 

 

 

图1:测定方式:A.夹心法,B.直接法

 

       免疫分析在多种疾病诊断起重要作用

 

       各类免疫测定技术各有优缺点,例如,快速测定法(如胶体金侧向流动法)可在数min 内提供定性结果,可进行即时检测,而ELISA可能需要花费数小时才能完成,但可提供定量数据。

 

 

       而当前严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2(SARS-CoV-2)大流行更加凸显了侧向流动分析的优势,由于该疾病具有快速传播和较高的死亡率等特征,美国FDA已采取相关措施,允许各州未经FDA批准就可开展新的SARS-CoV-2检测。该修订允许使用快速检测试剂盒,该试剂盒定性检测患者针对SARS-CoV-2产生的IgG和IgM抗体,从而显著加大了SARS-CoV-2的检测能力,尽可能地减少病毒的传播。尽管侧向流动检测具有明显的优势,但这种分析方法无法提供定量的数据。

 

 

表1.几种类型的免疫测定法的优缺点,检测过程,检测的Ig类型
 

免疫测定方法 检测过程 可检测免疫球蛋白
快速测试/横向流动(胶体金) 胶体金层析试纸条主要由4个部分组成:在样品区滴加样品后,借助毛细作用,样品泳动至玻璃纤维膜,金标复合物溶解,并与样品进行抗原抗体反应,形成复合物,继续泳动至硝酸纤维素膜的检测区,带有金标记的复合物被检测区抗原或抗体捕获,呈现条带。而质控线不管有无目的样本,都会与金标抗体进行结合并显色,相当于我们的阳性对照,证明金标抗体是正常的。 IgG,IgM
流式细胞 将血清样品添加到带有抗原的细胞或磁珠中,样本中的人源抗体会捕获抗原,再加入荧光探针偶联的二抗(图1B),然后可以通过流式细胞仪分析荧光以给出定量数据。 IgG,IgM,IgA
流动注射分析(FIA) 与流式细胞术相似,将样品注射到含有固定抗原的柱子中,样品中的人源抗体会与抗原结合(图1B),再加入荧光探针或酶偶联抗人的二抗进行检测,用比色或荧光法进行检测。 IgG,IgM,IgA
ELISA法 将一抗固定在固体介质表面上,通常是微孔板,随后会捕获抗原(图1A)或将抗原直接包被在板上(图1B),与来自血清的人源抗体结合,加入酶标记的抗人二抗,最后,添加酶底物,从而得到与分析物浓度成正比的比色读数。 IgG,IgM,IgA
聚合酶链反应(PCR)该过程类似于ELISA,但是第二抗体是与寡核苷酸缀合。然后通过实时PCR进行DNA扩增和检测。IgG,IgM,IgA


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