额外结构域B在胶质瘤的研究进展
胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发恶性肿瘤，约占中枢神经肿瘤60%，以侵袭性强、复发率高、预后差为特征。新生血管系统在胶质瘤发生、发展、侵袭、迁移等一系列生物学过程中，扮演着重要角色，抗血管治疗一直是胶质瘤研究的焦点和热点。
额外结构域B（extra domain B，ED-B）能够在特定脑肿瘤新生血管区域表达，而在正常组织不表达，这种小分子物质及其抗体对胶质瘤新生血管具有重要临床应用价值，因此，可通过ED-B寻找有效血管靶点，为胶质瘤诊治提供理论依据。
1.ED-B概述
正常血管壁的基膜主要由层黏连蛋白（laminin，LN）、胶原纤维、蛋白多糖及纤维连接蛋白（fibronectin，FN）等分子构成，其中FN是一种糖蛋白，由两条结构相近、相对分子质量约为250kDa的亚基组成，分子结构复杂。FN通过与整合素相互作用，影响细胞生长、分化和运动。
FN的premRNA剪切位点有3个功能区，即V型、ED-A型和ED-B型，其选择性剪切至少可产生20多种变体，其中部分FNⅢ区域产生的剪切变体中含有ED-B，后者有91个氨基酸，由单个外显子编码，可由成纤维细胞、血管内皮细胞、基质细胞和不同类型癌细胞（包括胶质瘤）产生。
正常组织一般没有ED-B，但在新生血管生成、肿瘤、组织纤维化、细胞迁移、修复等过程中，ED-B表达会明显增多。ED-B会使单个整合素结合位点保持完整，便于与细胞表面受体结合，在血管生成等方面有重要作用。ED-B氨基酸序列在脊椎动物高度一致，同时敲除ED-A和ED-B外显子，会引起老鼠多种心血管障碍，有胚胎致死作用。
2.ED-B与胶质瘤
2.1ED-B在胶质瘤中表达丰富
由于ED-B在胶质瘤血管中表达丰富的特异性，成为胶质瘤血管研究的焦点和热点。为明确ED-B在脑肿瘤组织（包括胶质瘤）的分布特点，曾使用单抗BC-1、IST6和IST4分别特异性识别脑肿瘤中的B+FN（ED-B表达阳性）、B-FN（ED-B表达阴性）和各种FN，染色结果证实ED-B主要存在于肿瘤和新生血管。由于胶质瘤细胞生成、增殖和迁移过程会不断产生ED-B，理论上胶质瘤级别越高，肿瘤新生血管EDB含量就越高，因此，单抗BC-1可临床用于胶质瘤级别辅助诊断与肿瘤复发的预测。
2.2ED-B抗体在胶质瘤诊断中的应用
2.2.1抗体BC-1的辅助诊断作用：抗体BC-1并非与ED-B直接结合，而是特异识别ED-B相邻的抗原表位。99mTc-BC-1判断胶质瘤瘤周生长效果好，肿瘤摄取99mTc-BC-1的量与ED-B表达相关性更佳。利用99mTc-BC-1在胶质瘤富集的特点，评估胶质瘤血管生成、肿块体积等方面有积极价值，临床可为MRI、SPECT、PET等影像学补充肿瘤定位信息。
2.2.2 L19在胶质瘤诊断的作用：ED-B抗体在高低级别胶质瘤鉴别诊断也有良好优势。L19是一种人工生产的单链重组抗体，利用L19与ED-B特异结合的特点，L19推算的血管生成指数（angiogenic index，AI）和胶质瘤分级具有更好相关性。因具有非侵袭、与胶质瘤相关度高等特点，弥补临床胶质瘤组织活检易导致颅内出血风险等缺点，抗体L19在高低级别胶质瘤鉴别诊断应用前景良好。许多低级别星形细胞瘤（B-FN阴性）可能发展为间变性星形细胞瘤（B-FN阳性），临床通过放射性标记的L19进行免疫追踪，可判断胶质瘤恶性进展。
2.2.3Anticalins在胶质瘤诊断及鉴别诊断中的作用：Anticalins是一类人工重组的非免疫球蛋白结合蛋白，分为3种类型：N7A、N7E和N9B，可与EDB特异性结合。Anticalins具有良好的组织渗透性、可协调的血浆半衰期、稳定性好（耐受温度达70℃）、分子量小、易于制备等特点。Anticalins染色区主要集中于胶质母细胞瘤的血管周围，并特异表达在胶质母细胞瘤起源的内皮细胞，说明Anticalins在预测胶质瘤新生血管表达情况的有效性和准确性。可能与高级别胶质瘤血供更丰富、血管内皮分化程度更低等有关。临床毛细胞型星形细胞瘤和胶质母细胞瘤有时因高度相似的血管化、有丝分裂、组织坏死等特点难以区分，而Anticalins可作为诊断及鉴别胶质母细胞瘤的有力手段。
2.3ED-B抗体在胶质瘤放疗中的应用
放射治疗是胶质瘤治疗的一个重要组成部分，应当精确、均匀给予肿瘤治疗剂量，尽量保证周围正常组织不受放射线损伤，减少并发症。但临床常因对肿瘤评估不充分，由于组织敏感程度不同等，使放疗达不到预期效果。为正确掌握放射物质体内生物学分布，克服局部区域有限的血供、组织间高压、抗体吸收等难题，以及评定放射剂量、提高放疗效果，同位素抗体标记正逐步受到青睐。因ED-B抗体具有选择性识别的特性，成为肿瘤放射治疗的有效辅助工具。
2.3.1 L19在放疗的作用：根据制备技术不同，ED-B抗体分类也不相同。L19是一种单链Fv抗体片段，与ED-B具有亚纳摩尔单位的亲和力，可分为3类抗体：二聚体单链Fv（～50kDa）、小免疫蛋白（SIP，～80kDa）和免疫球蛋白G1（IgG1，～150kDa）。BERNDORFF等在鼠畸胎瘤实验中分别用131I和90Y同位素标记此3类抗体，发现131I标记的SIP放疗效果更好、更安全。
采用放射性同位素治疗的胶质瘤病例放射性脑坏死发生率较高，并可出现头皮坏死、插植通道种植等并发症。反思目前胶质瘤放疗的上述弊端，抗体标记、生物分布剂量估算及毒副作用精确量化值得借鉴。结合放射性同位素的单克隆抗体，可特异性与肿瘤细胞内的相关抗原结合，通过放射性同位素衰变发出β射线或Auger电子，使染色体断裂而起靶向杀伤肿瘤细胞的作用。
SPAETH等利用131I标记的抗ED-B抗体小分子免疫蛋白（L19）和正常组比较，评估放射免疫治疗（radio immunotherapy，RIP）对胶质瘤疗效，发现131I标记L19的RIP疗法，相对传统RIP在胶质瘤辅助治疗中，有更好应用前景。可能与L19分子稳定性好，特异性靶向识别新生血管，肿瘤区放射药物浓度高，副作用小等特点紧密相关。
2.3.2BsAb在放疗的作用：ED-B双特异性抗体（AP39xm679，bsMAb）比小分子免疫蛋白（L19）在放射疗法治疗胶质瘤方面更具有优势。BsAb可通过将效应细胞转向胶质瘤细胞，以非MHC限制的方式增强肿瘤杀伤。此外，BsAb不仅在治疗剂和靶标之间提供有效连接，而且可同时阻断肿瘤发生的双重信号通路，因其具有稳定性好，表达量高，溶解度高，在肿瘤组织潴留时间更长，血浆清除率更快等特点，逐渐走进科研工作者的视野。
2.4ED-B抗体在胶质瘤化疗中的应用
由于ED-B在新生血管内皮细胞和胶质瘤细胞特异表达，因此，成为化疗研究新热点。GU等设计与ED-B具有纳米级亲和力的APTEDB，能靶向锚定胶质瘤细胞和新生血管，具有抑制胶质瘤血管生成和杀灭肿瘤细胞的双重效果，细胞APTEDB内化程度越高，抗增殖能力越强，且没有明显毒性作用，克服以往化疗药物的高陪化率等问题，为胶质瘤化疗提供新思路。但APTEDB在胶质瘤异质性，血-脑脊液屏障开放，化疗耐药性的产生和联合用药的效果等方面知之甚少，值得深入研究。
2.5ED-B抗体与分子靶向药物在胶质瘤治疗中的应用
分子靶向药物治疗胶质瘤是未来达到临床治愈目标的可行方案之一。IL-2、TNF-α等细胞因子与胶质瘤增殖、侵袭等密切相关，靶向药物的研发将改善胶质瘤治疗现状。由L19组成的分子靶向药具有显著抗瘤效果，且无明显毒副作用。目前无有此类靶向药治疗胶质瘤的报道，一是胶质瘤复杂的生物学行为和体内内环境变化易影响靶向药物发挥作用。二是当代生物科学技术未能开发完善的药物投递系统。三是目前临床研究的疗效评价标准可能并不完全适用于分子靶向药物。但ED-B抗体与细胞因子联合作用的新思路无疑为胶质瘤治疗带来新曙光。
3.问题与展望
ED-B参与胶质瘤血管生成的具体机制（与VEGF协调？影响细胞周期？）。在抗原抗体结合选择时，如何选择胶质瘤细胞上更多靶点，以构建更多有针对性的抗肿瘤靶点的抗体（如L19分子）。在抗体制备时，如何选择高效的表达系统，如何有效纯化。体内应用ED-B分子靶向药后，如何解决血-脑脊液屏障开放导致的脑脊液离子不平衡等问题，尚需进一步临床实验及大宗病例研究。
