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植物体内抗坏血酸氧化酶活性的测定实验

2019.11.15

实验方法原理

	抗坏血酸氧化酶在有氧情况下，能氧化抗坏血酸成脱氢抗坏血酸，同时促进其氢与空气中的氧结合成水。抗坏血酸氧化酶的测定是在该酶的最适pH及适宜的温度下，向反应瓶中加入一定量的底物（抗坏血酸）及酶提取液，让酶作用一段时间，然后测定底物被消耗的数量来计算酶的活性。抗坏血酸被消耗的量，可用碘液滴定剩余的抗坏血酸来测定。反应式如下：上述式中I2来自以下反应： KIO3 + 5KI + 6HPO3 --→ 3I2 + 6KPO3 + 3H2O
实验材料	水稻黄化幼苗马铃薯块茎植物叶片
试剂、试剂盒	磷酸盐缓冲液抗坏血酸偏磷酸淀粉溶液碘酸钾配制碘液配制
仪器、耗材	研钵 50 ml量筒 50 ml三角瓶微量滴定管滴定架移液管移液管架恒温水浴洗耳球
实验步骤	一、实验步骤 1. 酶液提取称取新鲜样品（水稻黄化苗2～3g，马铃薯块茎用5g）剪碎置研钵中，加少量石英砂及pH6的磷酸缓冲液，迅速研磨成匀浆（事先将缓冲液用冰水冷却，不使研磨时温度增高）。把全部材料用缓冲液洗入50 ml容量瓶中，定容至刻度。放在18～20℃水浴上浸提30min（其间摇动数次）。然后将上清液（酶浸提液）用棉花过滤于干净的三角瓶中备用。 2. 酶活性的测定取3个50 ml三角瓶，标上号码，按下表准确加入各项试液: 先在各瓶中加入pH6磷酸缓冲液4 ml，0.1％抗坏血酸2 ml, 并向3号瓶加入10％三氯乙酸1 ml，以每隔1 min在各瓶中依次加入酶液3 ml（视酶活性增减酶用量），准确记录加入酶液的时间，摇勺后将各瓶在18～20℃水浴中酶促反应5 min后，立即向1、2号瓶各加入10﹪三氯乙酸1 ml，以终止酶的活动，然后各瓶加入1％淀粉液3滴作指示剂，用微量滴定管以mol碘液进行滴定，以出现浅兰色为滴定终点。记录滴定值。
其他	酶活性的计算：