植物体内多酚氧化酶活性的测定实验
实验方法原理
多酚氧化酶是一种含铜的氧化酶，在有氧的条件下，能使一元酚和二元酚氧化产生醌。用分光光度法在525nm波长下测其吸光度，即可计算出多酚氧化酶的活力和比活性。反应式如下：. | |
| 实验材料 | |
| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 | 1. 粗酶液的制备 称取马铃薯块茎5g于研钵中，加入0.5g 不溶性聚乙烯吡咯烷酮（事先用蒸馏水浸洗， 然后过滤以除去杂质）和100 ml 0.1mol·L－1pH6.5磷酸缓冲液,磨成匀浆，用几层 纱布袋过滤，滤液加入30%饱和度硫酸铵，离心除沉淀，上清液再加硫酸铵使达60％ 饱和度，离心收集沉淀。将所得沉淀溶于2～3 ml 0.01mol·L－1 pH6.5磷酸缓冲液 中，即为粗制酶液。 2. 活性酶的测定 在试管中加入3.9 ml 0.05 mol·L－1 pH5.5磷酸缓冲液，1.0 ml 0.1 mol·L－1 儿茶酚在37℃恒温水浴中保温10min ，然后加入0.5 ml酶液（可视酶活性增减用量）， 迅速摇匀，倒入比色杯内，于525nm波长处以时间扫描方式，在1～2min内测定吸光度 变化（A）值。 |
| 其他 | 酶活性的计算： |
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