农杆菌的转化
实验概要
本实验介绍了农杆菌感受态细胞的制备及转化方法。
主要试剂
YEP固体培养基，含有相应抗生素的YEP培养基，0.15mM NaCl，20mM CaC12，液氮，选择平板(Rif 100ug/mL加Gm 50ug/mL加Kan 50ug/mL )
主要设备
培养箱，摇床，离心机，-80℃冰箱
实验步骤
1. 感受态细胞制备
1) 将农杆菌在含有相应抗生素的YEP固体培养基上划线，30℃培养2-3天，出现菌落。
2) 挑取单菌落置于5mL含有相应抗生素的YEP培养基中，220rpm，30℃培养过夜。
3) 取过夜培养的菌液2mL，转接在100mL含有相应抗生素的YEP培养基中，220rpm，30℃继续培养至O.D600=0.5。
4) 将菌液冰浴30min，然后在4℃条件下500rpm离心5min，弃去上清。
5) 将菌体重悬于l0mL 0.15mM NaCl中，4℃条件下500rpm离心5min，弃去上清。
6) 将菌体重悬于1 mL 20mM CaC12中，分装成0.2mL的小份在液氮中速冻之后保存于-80℃冰箱或立即使用。
2. 转化
1) 加质粒(0.1-0.5ug)于融化的感受态细胞中，混匀，冰上放置25 min。
2) 液氮速冻60 s，37℃放置3 min。加100uL液体YEP培养基，28℃复苏培养3h。涂于选择平板(Rif 100ug/mL加Gm 50ug/mL加Kan 50ug/mL )，28℃培养2至3天。
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