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如何使用M5 多功能微孔板读板机和IMAP® 荧光偏振...(二)

2020.6.02

结合反应

步骤1.将75%的结合缓冲液A与25%的结合缓冲液B混合,制备结合缓冲液;

步骤2.将结合试剂以1:600倍稀释成结合缓冲液,得到结合反应液;

步骤3.移出60ul结合反应液到每个检测孔和校正标准孔中(包括背景孔样本)

步骤4.室温避光孵育1小时

在SoftMax Pro软件上设置模板,并在SpectraMax M5多功能微孔板读板机上进行读数

Note:FAM和TAMRA标记底物的IMAP荧光偏正实验的模板在SoftMax Pro 5 软件上已预设好,详见Binding Assays模板文件夹。

步骤1.打开SoftMax Pro软件上针对荧光素使用的IMAP 荧光偏振模板。FAM和TAMRA模板已预设好;如果使用的不是FAM和TAMRA荧光素,只需调整波长设置即可。对于SpectraMax M5多功能微孔板读板机上的参数设置(见图表2)。

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步骤2.设置一个试验模板,选定背景样品本孔、激酶样品本孔、校正标准品孔。激酶试验样品和校正标准品可分到SoftMax Pro软件模板上预设好的8个样本组中。在计算最小偏振值(mP)之前,首先将只含有缓冲液的质控品分到相应的背景组中后,使用软件自动扣除其背景荧光值。

20156114349619.jpg

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步骤3.把微孔板放到读板机里后---确保紫色托架(适配器)放置在微孔板托架上---然后点击Read读板。


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