使用SpectraMax微孔板读板机检测Quant-iT PicoGreen dsDNA实验 二
- 高浓度范围标曲可以浓度从1 ng/mL制备到1 μg/mL，低浓度范围标曲可以从25
pg/mL制备到25 ng/mL。对于高浓度范围标曲，按Table 2中稀释方案稀释；对于低浓度范围标曲，40倍稀释2μg/mL溶液制备50
ng/mL溶液，参考Table 3中的稀释方案。 注意：此篇应用文档，使用了浓度从1 μg/mL到50pg/mL的一系列标曲。
- 用移液器将100 μL每孔标准品转移到一个黑色 96-孔微孔板中，最好3个重复。确保向孔中加TE(无DNA)来作为空白孔。
- 加100 μL每孔Quant-iT PicoGreen试剂水相工作液。通过涡旋或震板机室温避光混合2到5分钟。
读取微孔板
- 确保紫色板子适配器(如果您的读板机需要的话)放入微孔板读板机的板托中。
- 点击SoftMax Pro软件中的Read按钮。仪器会读取板子并且相对荧光单位会显示在程序的板子区块中。
分析数据
- 微孔板读取之后，相对荧光单位 (RFUs)会被显示在板子区块中。模板建立设定的组表格中的数据会被分析。一套有代表性的组表格中的数据，见Table 4结果区块。
- 模板中分配指定的标准品会在程序中标准曲线区块被自动拟合成曲线(并显示在标准品组表格中)。默认设置是线性曲线拟合，但是拟合宽范围标曲时可使用loglog曲线拟合。可在曲线图区曲线拟合下拉菜单中选择曲线拟合。
结果
使用Quant-iT PicoGreen dsDNA实验和SpectraMax? M5 微孔板读板机测定浓度从1μg/mL到50 pg/mL的DNA标准品(MolecularDevices 公司其他荧光微孔板读板机会得到相似结果)。SoftMax® Pro软件会对每组标准品重复自动化校准并计算平均RFU，标准偏差，和%CV。使用SoftMax Pro软件loglog曲线拟合方式拟合标准曲线 (见Figure 1.)使用96孔板微孔板格式观察到的灵敏度低至63 pg/mL并且标准检测限通过孔板三倍标准偏差值校准。这数值明显低于QuantiT PicoGreen实验产品说明书中标称的250 pg/mL。Figure 2展示了低浓度端标准曲线。整个标曲范围的线性都非常好。
结论
Quant-iT PicoGreen dsDNA 实验，当在使用SoftMax Pro软件的SpectraMax微孔板读板机上检测时，是一种对于双链DNA快速，灵敏的检测方法。SoftMax Pro软件的分析能力通过一种方便阅读，客户可定制的报告格式提供定量分析。软件中预设的程序使快速的实验设置成为可能。
Molecular Devices公司额外的解决方案
SoftMaxProGxP软件为必须展示符合FDA21CFRPart11的GLP/GMP客户提供额外的工具和特性。具有优化的硬件和软件验证工具来加速和简便化验证过程，使展示数据采集和分析的符合性更简单。
对于更高的通量要求，Molecular Devices的’StakMax®多孔板操作系统能整合SpectraMax读板机并可实现自动化处理20,40,或50个一批的微孔板。
对于需要检测极低水平的DNA的客户MolecularDevices提供Threshold®系统和Threshold总DNA实验试剂盒。Threshold系统能检测和定量皮克级污染物，污染物包括总DNA宿主细胞蛋白，牛源污染物(如BSA，IgG，胰岛素，铁传递蛋白)，蛋白A和G，和任何能被抗体结合的独特的蛋白。
参考
1.Molecular Probes Data Sheet MP 07581 (20 December 2005): Quant-iT PicoGreen dsDNA Reagent and Kits.
