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基因治疗-创新多重技术组合严控腺相关病毒(AA...(三)

2021.2.22

灵敏度及线性

将变性的AAV2从〜3 x 1012 GC/mL连续滴定至〜3 x 1011 GC/mL(图6)以建立方法的灵敏度。该滴定范围内观察到很强的线性相关性,R2为0.9956。

监测AAV颗粒稳定性

对完整的AAV样品进行温度压力测试,以确定是否可以使用Maurice监测病毒载体的稳定性或衣壳蛋白脱酰胺。

AAV6颗粒非常稳定,在37°C或50°C下保持10分钟完整无缺。但是,当AAV6颗粒在60°C下10分钟时,不稳定。

监控AAV批间差

利用Maurice icIEF天然荧光监测批次间变异,以鉴别病毒载体批间差别。五批不同的AAV6,每批具有不同的基因组含量/mL(GC/mL),Maurice icIEF自发荧光分析(图9)。结果显示,所有五个批次在pI〜9.25左右均产生相似的峰形。但是,在一批中观察到了一个较低pI的附加峰,表明该样品与其他四批样品不同。

主要参考资料

1. Deamidation of amino acids on the surface of adeno-associated virus capsids leads to charge heterogeneity and altered vector function, AR Giles, JJ Sims, KB Turner, L Govindasamy, MR Alvira, M Lock, JM Wilson, Mol Ther, 2018; 26(12):2848-2862.

2.Dan Wang, Phillip W. L. Tai and Guangping Gao,Adeno-associated virus vector as a platform for gene therapy delivery,Nature Reviews Drug Discovery, 2019


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